Особенности определения резус-фактора и пола плода по материнской крови методом ПЦР, кому показан и когда его можно проводить?

Особенности определения резус-фактора и пола плода по материнской крови методом ПЦР, кому показан и когда его можно проводить?

Генетический маркер, используемый для определения резус-фактора плода по фетальной ДНК. Анализ выполняется только с 10-й недели беременности при отрицательном резус-факторе беременной женщины.

Выявление наличия/отсутствия 7-го и 10-го экзонов гена RHD; генотипирование гена RHD по фетальной ДНК.

Fetal RHD genotyping test.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь беременной женщины с серологическим отрицательным резус-фактором с 10-й недели беременности.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

С точки зрения иммунологии беременность на всём протяжении рассматривается как процесс смены этапных иммунных конфликтов. В основном эти конфликты являются нормальными физиологическими процессами и не только не оказывают патологического воздействия на организм матери и плода, но и помогают нормальному течению беременности. С их помощью реализуются такие этапы беременности, как имплантация плода, формирование гормонального фона беременности и, конечно, сами роды. Кроме того, существует ряд патологических конфликтов, которые могут существенно осложнять течение нормальной беременности, иногда приводя к летальному исходу. Одним из них является резус-конфликт между матерью и плодом.

Система резус (Rh) – одна из самых полиморфных и иммуногенных систем, известных у людей; она представлена группой белковых молекул, расположенных на поверхностной мембране эритроцитов. Наиболее изученными белками (антигенами) этой группы являются антигены D, C, c, E и e, которые кодируются генами RHD и RHCE, расположенными на хромосоме 1. Наличие в геноме гена RHD приводит к появлению на эритроцитах антигена D, что соответствует резус-положительному фенотипу (Rh+). Резус-отрицательный фенотип (Rh-) формируется в результате отсутствия обоих гомологичных аллелей гена RHD.

Важнейший фактор возникновения резус-конфликта при беременности – формирование резус-положительного плода у резус-отрицательной матери. Несмотря на то что кровоток плода и матери разделены плацентой, фрагменты клеток и ДНК плода (фетальная ДНК) могут проходить через неё. Проницаемость плаценты может увеличиваться при ряде патологических процессов: гестоз, заболевания матки, прием лекарственных препаратов, соматическая патология и т.д. При попадании в кровь матери антигенов D плода на них вырабатываются резус-антитела (RhAb). Для матери они безвредны, но, проходя обратно через плаценту, они инициируют развитие гемолитической болезни плода и новорождённого путем связывания с эритроцитами плода и последующим их разрушением. Такие состояния являются фактором риска перинатальной смертности, что подчеркивает необходимость ранних диагностических и превентивных терапевтических стратегий сохранения жизнеспособности плода.

В настоящее время существует два основных метода определения резус-фактора. Первый метод – серологический – подразумевает выявление антигена D на поверхности эритроцитов с помощью специфических антител. Он подходит для широкого рутинного обследования. К существенным ограничениям этого метода относятся: 1) необходимость наличия для исследования живых эритроцитов, что делает невозможным использование его в пренатальной диагностике резус-фактора плода; 2) наличие мутации внутри гена RHD либо изменение уровня его экспрессии. В данных случаях серологическое исследование может дать ложноотрицательный результат (Rh- при наличии гена RHD), так как диагностические антитела не смогут связаться с поврежденными или отсутствующими молекулами антигена D.

Альтернативой серологическому исследованию резус-фактора служит генотипирование на наличие или отсутствие гена RHD. В случае пренатальной диагностики в качестве материала для исследования используется фетальная ДНК, выделенная из крови матери. Генотипирование проводится по нескольким фрагментам (7-й и 10-й экзоны) гена. Необходимое условие, увеличивающим специфичность данного метода, – его использование на сроках 10 и более недель беременности у серологически резус-отрицательных женщин. Основным методом генотипирования в данном случае является полимеразная цепная реакция, выявляющя наличие или отсутствие гена RHD в материале.

С учетом того что концентрация фетальной ДНК в крови матери крайне низкая, а также с учетом возможности наличия серологического ложноотрицательного резус-фактора у матери и наличия мутаций в гене RHD генотипирование резус-фактора плода проводят, исследуя ряд показателей: 1) наличие/отсутствие не менее двух фрагментов (7-й и 10-й экзоны) гена RHD; 2) с учетом сигнала от геномной ДНК матери.

Для чего используется исследование?

  • Для прогнозирования развития резус-конфликта между резус-положительным плодом и резус-отрицательной матерью.
  • Для решения вопроса о стратегии профилактики гемолитической болезни плода и новорождённого.

Когда назначается исследование?

C 10-й недели беременности.

Что означают результаты?

В процессе исследования формируется четыре типа заключения.

1. Отсутствие обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне достаточного количества сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется отрицательный резус-фактор плода у резус-отрицательной матери. Данное состояние не требует терапевтической коррекции.

2. Наличие обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне высокого количества сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется положительный резус-фактор плода у резус-отрицательной матери. Данное состояние может вызывать резус-конфликт (особенно при повторных беременностях) и требует терапевтической коррекции. Следует отметить, что у матери должен быть серологически подтвержденный отрицательный резус.

3. Наличие обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне равного количества сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется, возможно, положительный генетически резус-фактор у матери, резус-фактор плода идентифицировать не представляется возможным.

4. Наличие слабого сигнала обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне слабого сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется сомнительный результат. Наличие слабого сигнала геномной ДНК, независимо от сигнала с обоих фрагментов гена RHD, либо наличие одного из двух фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне высокого количества сигнала геномной ДНК указывает на недостоверный результат. Во всех этих случаях требуется проведение повторного исследования.

Что может влиять на результат?

  • На получение достоверного результата может повлиять наличие у матери серологического ложно-отрицательного результата (Rh- при наличии гена RHD) вследствие наличия мутаций внутри гена RHD либо изменение уровня его экспрессии.
  • Срок исследования менее 8-10 недель беременности.
  • Малое количество фетальной ДНК, например при патологии плаценты.

Данное исследование должно проводиться при каждой беременности у резус-отрицательной матери.

Кто назначает исследование?

Акушер-гинеколог, терапевт, гематолог, врач ОВП.

Особенности определения резус-фактора и пола плода по материнской крови методом ПЦР, кому показан и когда его можно проводить?

В России процент резус-сенсибилизированных женщин достигает 1,2 % (Сидельникова В.М. и соавт. 2004; Савельева Г.М. и соавт., 2004). В развитых странах мира количество женщин c Rh-сенсибилизацией равно 0,1-0,2 %. Столь низкий процент достигнут благодаря внедрению в клиническую практику специфической профилактики путем введения антирезус-иммуноглобулина несенсибилизированным резус-отрицательным женщинам. Разница в количестве сенсибилизированых женщин возникла по нескольким причинам, одна из которых – высокая стоимость антирезус-иммуноглобулина, покупать который приходится за свой счет. Хотя вводить данный препарат необходимо только тем резус-отрицательным беременным женщинам, чей плод является резус-положительным.

Вопреки мнению, что плацента образует барьер между матерью и ребенком, это не так (Loetal., 1996). Многочисленные исследования показали, что как целые клетки плода, так и внеклеточные фетальные ДНК проходят через плаценту и циркулируют в материнском кровотоке.

Интактные фетальные клетки, циркулирующие в материнском кровотоке, являются привлекательной мишенью для неинвазивной пренатальной диагностики, а именно для диагностики резус-фактора плода, пола плода и хромосомных аномалий путем простого кариотипирования. Хотя существование фетальных клеток в материнской крови известно более века, непосредственно интактные фетальные ядерные красные кровяные клетки с целью пренатальной диагностики не использовались до 1990 года. С этого времени выделение и обнаружение клеток плода из крови матери начали интенсивно исследоваться, и стали появляться различные методы выделения фетальных клеток, которые были в разной степени успешными. Однако результаты исследований были неутешительные. Это было обу­- словлено недостаточностью интактных клеток плода, циркулирующих в материнском кровотоке (около 1 клетки в миллилитре материнской крови) (Bianchi и соавт., 1997), низкой эффективностью исследований (Bianchi и соавт., 1997). Хотя некоторые клетки плода (в частности ядерные красные кровяные клетки плода) имеют сравнительно короткую продолжительность жизни в материнской крови, фетальные клетки других типов могут сохраняться в материнской крови десятилетия после беременности и потенциально способны вызвать ложноположительные результаты при последующих беременностях. Таким образом, несмотря на то, что современные исследования пытаются улучшить технику сортировки клеток, большинство последних научных исследований сосредоточены на бесклеточной ДНК плода в крови матери, которая представлена в достаточном количестве (Lo и соавт.1998).

Огромное количетво человеческой ДНК расположено внутри клетки, но присутствие небольшого количества вкДНК в циркуляции и здоровых, и больных женщин было открыто в 1947 г. Хотя их биологический источник и потенциальная функция остаются неопределенными, предполагают, что это продукт апоптоза, в результате которого происходят фрагментация и выход хромосомных ДНК из клетки. Присутствие ДНК плода в материнской циркуляции была продемонстрировано Lo и соавторами в 1998 году.

Фетальные ДНК образуются путем апоптоза плацентарных клеток (трофобласта), полученных от и составляют примерно 3-6 % от общих бкДНК в материнском кровотоке в начале и конце беременности соответственно (Lo и соавт. 1998) (оставшиеся 94-97 % составляют материнские вкДНК).

ДНК плода можно обнаружить с 4-й недели гестации, хотя надежно только с 8 недели концентрация его возрастает с увеличением гестационного возраста- от 16 фетальных геномов на миллилитре крови матери в первом триместре беременности до 80 в третьем триместре) -с острым пиком в течение последних 8 недель беременности (Lo и др., 1998). В отличие от фетальных клеток, вкфДНК быстро выводится из крови матери с периодом полураспада 16 мин и не определяется через 2 ч после родов.

Цель исследования – оценить метод неинвазивной диагностики резус-фактора плода по крови беременной женщины.

Материалы и методы исследования

Для определения резус-фактора плода была использована фетальная ДНК из плазмы крови беременной резус-отрицательной женщины. В исследовании принимали участие 150 беременных резус-отрицательных женщин. Были использованы образцы венозной крови объемом 7 мл. В каждом случае женщины подписывали информированное согласие.

Для выявления гена резус-фактора применялась ПЦР в реальном времени с использованием диагностических наборов для идентификации гена резус-фактора плода в крови матери «ДНК-резус ребенка» производства ООО «Ген-технология» (Россия, РУ № ФСР2010/09565).

Определение резус-фактора плода по крови беременной резус-отрицательной женщины основывается на том, что в плазме крови беременной женщины присутствует внеклетчная фетальная ДНК.

Для правильного определения резус-фактора плода по крови беременной женщины необходимо соблюдение следующих условий:

1. Срок беременности – с 10 недель.

2. Правильное обращение с плазмой, выделение ДНК в максимально быстрые сроки.

3. Выделение ДНК с использованием надёжной технологии.

4. Организация работы в ПЦР-лаборатории согласно действующим национальным нормам.

5. Чёткое следование инструкции.

Исследование проводится в несколько этапов:

1. Взятие крови и выделение плазмы. Исследуемым материалом для проведения анализа является венозная кровь беременной резус-отрицательной женщины. Кровь сдаётся натощак, собирается в пробирку с антикоагулянтом EDTA в количестве 7-10 мл. В течение 24 ч с момента взятия крови следует отобрать плазму и перенести в новую пробирку. Плазма должна доставляться в лабораторию в течение 16-24 ч после взятия материала.

2. Выделение ДНК. Проводится колоночно-адсорбционным методом с использованием рекомендуемых комплектов наборов, предназначенных для выделения циркулирующих нуклеиновых кислот из биологических жидкостей согласно методике производителя.

3. Проведение амплификации с детекцией в режиме реального времени. Пробоподготовка – стандартная для проведения ПЦР. Подготавливаются реакции для непосредственного выявления гена резус-фактора в исследуемой пробе, а также контрольные реакции, подтверждающие правильность выполнения исследования. Реакция занимает от 1,5 до 2 часов (в зависимости от скорости изменения температуры амплификатором).

4. Регистрация и учёт результатов анализа.

Результаты исследования и их обсуждение

Все 150 женщин, вступившие в исследование, были резус-отрицательные по результатам серологического анализа. Для 115 из них стал известен резус-фактор рожденного ребенка.

Резус-фактор рожденных детей оценивался серологическим методом в роддоме.

ДНК-анализ 76 образцов указал на положительный резус-фактор плода, в 39 случаях был установлен отрицательный резус-фактор. Результаты анализа были подтверждены анализом крови детей после их рождения. В одном случае результат анализа не совпал (при отрицательном резус-факторе по данным тест-системы фактический резус-фактор оказался резус-положительным). Следует отметить, что срок беременности для этой пациентки составил 9 недель, в то время, как минимальным сроком, гарантирующим правильность результатов анализа, является срок 10 недель. Следовательно, данный результат не может использоваться при оценке аналитических характеристик тест-системы. У двух детей резус фактор был определен неправильно в роддоме. После полученния результата анализа на определение резус-фактора этих детей, не совпадающего с нашими результатами, у них был взят буккальный соскоб и проведено генетическое определение резус-фактора. Результат данного анализа подтвердил правильность определеного нами резус-фактора плода по крови беременной женщины.1,8 % (2 ребенка) – неправильное определение резус-фактора детей в роддоме

Таким образом, чувствительность и специфичность применяемого метода диагностики составили 100 %.

Выводы

– новые диагностические наборы для идентификации гена резус-фактора (RHD) «ДНК-резус ребенка» российского производства можно рекомендовать для внедрения в медицинскую практику акушерам-гинекологам для ранней неинвазивной диагностики резус-фактора по крови беременной женщины;- определение резус-фактора на раннем сроке беременности позволяет избежать дорогой медикаментозной профилактики;

– введение антирезус-иммуноглобулина всем резус-отрицательным женщинам, беременным резус-положительным плодом, в дальнейшем приведет к снижению процента резус-сенсибилизированных женщин в России.

Рецензенты:

Шатунова Е.П., д.м.н., доцент, заведующая отделением гинекологии Клиник Сам ГМУ, г. Самара;

Шляпников М.Е., д.м.н., доцент, зам. главного врача по акушерству и гинекологии ММБУ ГКБ№ 2 им. Н.А. Семашко, г. Самара.

Как узнать резус фактор плода

Статья опубликована: 2018-03-30

Рейтинг: 5 из 5

Под понятием «резус фактор» подразумевают белок, который покрывает поверхность эритроцитов. Если он отсутствует, значит, данный показатель является отрицательным. Этот параметр обязательно учитывается при беременности, поскольку его разное значение у женщины и плода может спровоцировать резус-конфликт. Поэтому вопрос о том, как определить резус фактор у ребенка до рождения с высокой точностью, является жизненно важным.

Для чего это необходимо? Возникновение такого конфликта чревато самыми неприятными последствиями. Это может вызвать гемолитическую болезнь, быть гибель плода или рождение ребенка с различными патологиями. Формирование резуса у плода происходит на восьмой неделе беременности, именно в этот период и может возникнуть опасная ситуация.

Поэтому, во время беременности обязательно проводится анализ на определения резус-фактора. Это поможет в дальнейшем контролировать ситуацию, по количеству выявленных антител следить за возможным развитием конфликта и своевременно назначить терапию. Точная диагностика и своевременно принятые меры позволят благополучно выносить и родить абсолютно здорового ребенка.

Как определить резус фактор крови у ребенка

До недавнего времени анализ проводился с применением инвазивных методик. Чтобы узнать резус фактор крови у плода, проводили процедуру кордоцентеза или исследовали амниотическую жидкость. Для этого производили забор материала из пуповины или околоплодных вод путем проникновения в полости. Такие манипуляции сопряжены с определенным риском, вероятность прерывания беременности достигает до 3%.

Поэтому инвазивные исследования назначали только при достижении определенного уровня антител. Несмотря на всю сложность, данная методика не обеспечивала необходимой точности результата.

На сегодняшний день существует безопасная и надежная альтернатива инвазивным методам исследования — это неинвазивный пренатальный ДНК тест. Она позволяет безо всяких рисков для плода и будущей мамы провести необходимые анализы и получить точный результат.

Как узнать резус фактор ребенка

Современные технологии позволяют проводить высокоточные молекулярно-генетические исследования без вмешательства в полость матки. Как узнать резус фактор крови ребенка самым безопасным и точным способом? На первых сроках беременности в крови женщины уже присутствуют фетальные ДНК, доля которых может составлять до 5% от общего количества.

Путем лабораторного анализа молекул ДНК плода устанавливается наличие или отсутствие гена RhD. Если он обнаруживается, значит, показатель малыша – положительный. Такое исследование получило название «ПЦР» — полимеразная цепная реакция. Материал для его проведения – венозная кровь будущей мамы.

Начиная с восьмой недели беременности, когда необходимые признаки сформировались на клеточном уровне, проведение ПЦР позволит абсолютно точно установить пол, наличие гена RhD и возможные наследственные заболевания.

Как определить резус фактор крови у ребенка в лаборатории ДТЛ

Молекулярно-генетический Центр «ДТЛ» специализируется на проведении современных исследований, основанных на последних научных достижениях. Наличие специального оборудования, штата высококлассных опытных специалистов позволяет проводить самые точные и результативные анализы.

Мы имеем большой опыт по проведению безопасных неинвазивных исследований для определения различных состояний плода. Все, что требуется от будущей мамы – сдать анализ крови. Сделать это можно непосредственно в нашем Центре или его представительствах в других городах. Для получения детальной информации и бесплатной консультации – предлагаем заказать обратный звонок.

Определение пола плода по крови матери

1. Принцип анализа

Во время беременности, уже на первом месяце, в крови матери в очень низкой концентрации появляются клетки и ДНК ребенка, которые специалисты называют фетальные клетки и ДНК.

Если женщина носит мальчика, то в ее крови появляется фетальная ДНК Y-хромосомы. Выявление маркеров Y-хромосомы позволяет определить пол будущего малыша. Так как концентрация фетальной ДНК очень низкая, то выявить ее можно только очень высокочувствительным методом.

Фетальная ДНК появляется в крови матери с 4-5 недели беременности. Однако индивидуальные особенности развития беременности не всегда позволяют получать достоверные результаты на этих сроках.

В период с 6 по 8 неделю уровень достоверности анализа составляет в среднем 90-95%. В этот период концентрация фетальной ДНК в крови матери повышается, и после 8-ми недель достоверность анализа достигает 100%.

2. Фрагментный анализ

Партнеры Медикал Геномикс смогут предлагать данную услугу на принципиально новом уровне. Нам удалось кардинально улучшить существующую несовершенную технологию определения пола плода и довести точность анализа до максимально возможной – более 99% – благодаря предварительной оценке количества свободно циркулирующей ДНК ребенка в крови матери с помощью фрагментного анализа.

Технология определения пола основана на выделении ДНК ребенка из крови матери и поиске в ней У-хромосомы, наличие которой свидетельствует о мужском поле плода, отсутствие – о женском. Но прежде чем тестировать образец на наличие У-хромосомы, мы устанавливаем, достаточно ли в крови матери ДНК ребенка для того, чтобы делать выводы о его поле. Таким образом, мы избегаем ложноотрицательных результатов, вероятность которых в отсутствие фрагментрого анализа весьма высока.

2. Факторы, которые влияют на уровень фетальной ДНК:

· неточное определение срока беременности (при очень ранних сроках)

· индивидуальные особенности организма женщины (например, низкий уровень свободно – циркулирующей внеклеточной ДНК1) и процесс развития плода (например, синдром «исчезнувшего близнеца»)

· принятие антикоагулянтов или препаратов для лечения заболеваний крови

· в последние 3 месяца было прерывание беременности или выкидыш, переливание крови или пересадка костного мозга от мужчины (или пол донора не известен)

Кроме того, при определении маркера Y-хромосомы (т.е. мальчик) достоверность анализа выше, т.к. отрицательный результат (т.е. девочка) может быть связан не с отсутствием маркера, а с необычно низкой концентрацией фетальной ДНК.

3. Обязательно ли сдавать кровь натощак?

Нет, не обязательно. Легкий завтрак допустим. Рекомендовано не употреблять жирное и сладкое

4. Какие сведения необходимо предоставить при сдаче крови на исследование?

Смотрите «Форму заказа».

5. Сколько времени выполняется анализ?

От 3 –х до 5 – ти дней.

6. Какова надежность/достоверность результатов?

Достоверность результатов зависит, прежде всего, от срока беременности.

При сроках беременности более 8 недель достоверность результатов исследования практически приближается к 100%.

При меньших сроках не всегда можно получить однозначные результаты. Как правило, если определяемый пол «мальчик», то результат надежен. Если – «девочка», то мы рекомендуем повторное исследование через 7-10 дней.

7. Можно ли добиться 100% достоверности результатов определения пола?

Да, можно. Для этого необходимо провести два последовательных исследования с независимым забором крови с интервалом в 7-10 дней.

8. Можно ли определить пол ребенка в случае двойни/тройни?

Можно, но следует учитывать, что если один из детей мальчик, то мы не можем определить пол другого ребенка. Поэтому возможны следующие варианты. Маркер Y-хромосомы не определен – все девочки. Маркер Y-хромосомы определен – один из детей – мальчик, другие дети могут быть как мальчиками, так и девочками. Кроме того, было замечено, что при многоплодной беременности один плод может подавлять развитие другого, что также может отразиться на результатах анализа.

9. Были ли случаи несовпадения результатов вашего анализа и УЗИ?

Да. Результат по крови оказался верным.

11. Можно ли определить резус – фактор плода по этому анализу?

Да, только с 12 – ой недели (информация по этому вопросу будет озвучена дополнительно).

ООО “Медицинский центр “Здоровье” © 2016 – 2021

Определение Rh плода по крови матери

ОписаниеПоказанияПодготовкаИнтерпретация

Описание исследования

Резус (Rh) является одной из важнейших систем эритроцитарных антигенов, клинически значимой для определения степени риска развития резус-конфликта и гемолитической болезни плода новорожденного (данная болезнь обусловлена несовместимостью матери и плода по антигенам эритроцитов и очень часто является причиной желтухи и малокровия у новорожденных).

Из пяти антигенов системы резус наибольшую иммуногенность (способность вызывать ответ иммунной системы организма) проявляет антиген D, кодируемый геном RHD. Положительный резус-фактор (Rh+) характеризуется присутствием данного антигена на поверхности эритроцитов, отрицательный резус-фактор (Rh-) – его отсутствием. Соотношение лиц с положительным и отрицательным резус-фактором приблизительно составляет 86 к 14% соответственно.

Частым осложнением беременности женщины с отрицательным резус-фактором является развитие гемолитической болезни плода. Данное состояние обусловлено попаданием через плаценту в кровь матери эритроцитов вынашиваемого ребенка. Подавляющее число случаев ГБН (гемолитической болезни новорожденного) вызывается действием D-резус-антигеном. Его попадание в кровь матери становится причиной образования специфических антител, проникновение которых через плаценту в организм ребенка вызывает разрушение эритроцитов. Развитие резус-конфликта на раннем сроке беременности может стать причиной выкидыша, а в дальнейшем – преждевременных родов. С каждой следующей беременностью резус-положительным плодом повышенная чувствительность матери к D-антигену и вероятность развития резус-конфликта повышаются, причем это не зависит от того, чем завершилась предыдущая беременность – родами или прерыванием.

На сегодняшний день существует комплекс исследований, предназначенный для выявления резус-конфликта. В него входят:

  • определение в крови матери количества специфических иммуноглобулинов к D-резус-антигену ребенка;
  • получение инвазивными методами (т.е. посредством проникновения в утробу матери) образцов тканей хориона (оболочки плода, формирующейся на ранних стадиях развития ребенка) и плаценты;
  • допплерография фето-плацентарного кровотока (определение скорости движения крови в аорте и средней мозговой артерии плода).

Инвазивные методы исследования в 2-3% случаев могут стать причиной самопроизвольного прерывания беременности, а отсутствие антител не является 100%-ным показателем резус-отрицательности плода. Дополнительная сложность ситуации состоит в возможности развития резус-конфликта на любом сроке беременности.

Кроме перечисленных, существует еще один метод диагностики – выявление ДНК плода в крови матери методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени. Преимуществами данного метода являются:

  • отсутствие угрозы протекания беременности и развития осложнений, т.к. обследование неинвазивное;
  • возможность ранней диагностики (начиная с 9-й недели беременности);
  • точность (не ниже 96%) полученных результатов (она зависит от состояния плаценты, особенности протекания беременности и увеличивается пропорционально сроку беременности).

Кроме того исследование наличия ДНК ребенка в крови матери позволяет определить, насколько необходимо введение ей иммуноглобулина при отсутствии на сроке 20 недель анти-резусных антител.

Метод ПЦР имеет ограничение, т.к. у 1% женщин с отрицательным резусом может обнаруживаться ген RHD, причиной чему являются его различные мутации. Для таких пациенток исследование резус-фактора плода только методом ПЦР неприемлемо – необходимо также проведение серологических тестов. Резус-фактор считается отрицательным в том случае, если совпадают отрицательные результаты тестов.

ПЦР исследование не проводится, если у пациентки в прошлом были случаи трансплантации тканей и органов.

Аналитические показатели теста:

  • выявляемые фрагменты ДНК: 7-й и 10-й экзоны (участки ДНК) гена RHD;
  • специфичность теста: 90-100%;
  • чувствительность исследования: 150 копий суммарной ДНК матери и ребенка, соответствующего 400 копиям RHD плода в 1 мл исследуемой плазмы крови.

Подготовка к исследованию

Забор крови рекомендуется проводить утром натощак или не ранее, чем через 4 часа после последнего приема пищи.

  • накануне обследования желательно избегать физических и психоэмоциональных нагрузок;
  • за сутки до отбора крови не употреблять спиртные напитки, за час – не курить;
  • перед обследованием согласовать с лечащим врачом возможность отмены препаратов, которые могут повлиять на результат тестирования;
  • кровь не отбирается после УЗИ, физиопроцедур и прочих манипуляций;
  • непосредственно перед забором материала желательно 10-15 минут провести в спокойствии.

Забор крови не рекомендуется осуществлять после инструментального, ректального, мануального, рентгеновского, ультразвукового обследований, биопсии, кольпоскопии, гастроскопии, физиопроцедур, массажа, прочих диагностических и/или терапевтических манипуляций.

Показания к исследованию

  • для наблюдения за течением беременности у женщины с отрицательным резус-фактором с целью своевременного определения риска возникновения резус-конфликта;
  • для определения вероятности развития резус-конфликта у женщин с отрицательным резусом при последующих беременностях в случае, если текущая была прервана путем хирургического вмешательства.

Тестирование проводится также в том случае, если есть необходимость введения беременной женщине с отрицательным резус-фактором иммуноглобулина к D-антигену плода с целью профилактики резус-конфликта.

Интерпретация исследования

Результат данного исследования может иметь следующие варианты:

1. Ген резус-фактора (RHD) плода не обнаружен. В этом случае принято считать, что резус-факто плода отрицательный, резус конфликт маловероятен (вероятность его не более 0,1%).

2. Ген резус-фактора (RHD) плода обнаружен. Интерпретация результата в этом случае формулируется так: резус-фактор положительный, резус конфликт возможен.

3. Ген резус-фактора (RHD) плода обнаружить невозможно. Данный результат интерпретируется так: ген (RHD) у матери обнаружен; данным методом невозможно выявить ген (RHD) плода. Не исключается вероятность развития резус-конфликта.

Применяемая для исследования тест-система включает опцию контроля взятия материала (КВМ). Если суммарное ДНК матери и ребенка ниже 0,1 нг в отобранной пробе, результат является недостоверным, а выдаваемый ответ содержит рекомендацию о повторном взятии пробы крови.

Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже:

Ф.И.О.: Петрова Инна Ивановна Пол: ж Год рождения: хх.хх.хххх

Дата исследования: хх.хх.хххх

Исследование

Результат

Нормы интерпретации

Примечание

[79] Определение Rh плода по крови матери

ВЫПИСКА

Резус-фактор плода (Ген RHD)

Чв 807 Иванова Пелагея Степановна

Внимание. Данное исследование проводится только у серологически резус-отрицательной пациентки при сроке беременности более 8 недель.

Заключение:

Возможно развитие резус-конфликта.

Точность результата зависит от количества ДНК плода, обнаруживаемой в материнской плазме. Данная величина обусловлена состоянием плаценты и возрастает с увеличением срока беременности.

Определение резус-фактора методом ПЦР в режиме реального времени заключается в обнаружении гена RHD плода, кодирующего D-антиген, в крови матери.

Традиционный серологический метод основан на выявлении непосредственно D-антигена на эритроцитах крови.

Согласно литературным данным, в 99% исследований результаты, полученные серологическим методом и методом ПЦР, совпадают. Однако у 1% генотипически резус-положительных лиц серологическим методом может определяться отрицательный резус-фактор, что связано с мутациями в гене RHD и, как следствие, отсутствием или функциональной неполноценностью D-антигена. Поэтому после родов рекомендуется уточнить резус-фактор ребенка серологическим методом.

Литература:

1. Costa J.M., Giovangrandi Y., Ernault P., Lohmann L., Nataf V., El Halali N., Gautier E. Fetal RHD genotyping in maternal serum during the first trimester of pregnancy. British journal of haematology. 2002;119:255-260.

2. Finning K.M., Martin P.G., Soothill P.W., Avent N.D. Prediction of fetal D status from maternal plasma: introduction of a new noninvasive fetal RHD genotyping service. Transfusion. 2002;42:1079-1085.

3. Freeman K., Osipenko L., Clay D., Hyde J., Szczepura A. A Review of Evidence on Non-invasive Prenatal Diagnosis (NIPD): Tests for Fetal RHD Genotype. Workpackage 6, SAFE Network of Excellence Warwick Medical School, UK. 2006.

4. Wagner F.F., Frohmajer A., Flegel W.A. RHD positive haplotypes in D negative Europeans. BioMed Central genetics. 2001;15:10.

5. Минеева П.В. Группы крови человека. Основы иммуногематологии. – СПб. 2004:188.

6. Инструкция по применению набора реагентов для выявления гена RHD плода в крови матери методом ПЦР в режиме реального времени Резус-фактор плода ООО «ДНК-технология». Регистрационное удостоверение № ФСР 2017/5310.

Тест на определение пола и резус-фактора ребенка в Москве

Резус-фактором называют белок, который синтезируется на поверхности эритроцитов. Если он отсутствует, то говорят об отрицательном резус-факторе.

Согласно статистике, этот белок не производится у каждого 7 жителя планеты. Если резус-фактор беременной женщины отличается от того, который будет у малыша, возможен резус-конфликт. Такое состояние может негативно отразиться на течении беременности или даже стать причиной ее прерывания. Чтобы этого избежать, будущей маме лучше заранее узнать резус-фактор будущего малыша.

Технология исследования резус-фактора по ДНК матери

Не так давно, чтобы узнать резус-фактор ребенка, нужно было проводить крайне опасную процедуру забора его крови инвазивным методом. Поэтому назначали проведение анализа исключительно в экстренных ситуациях.

Сегодня для процедуры делается забор венозной крови у будущей мамы. Исследование проводится методом ПЦР. В результате удается определить не только резус-фактор, но и группу крови малыша.

Информационный тест ДНК на определение резус-фактора ребенка выполяется в течении:

  • стандартное исследование — от 1 до 5 рабочих дней;

О предположительной дате выдачи результатов лаборатория сообщает в день получения образцов.

Оплатить анализ ДНК можно у представителя лаборатории в Вашем городе, где вы будете сдавать кровь

В каких случаях определяют резус-фактор плода

Если у мамы и будущего ребенка окажутся разные резус-факторы, возможно развитие таких осложнений:

  • гемолитическая болезнь плода;
  • нарушение развития внутренних органов и нервной системы у плода;
  • преждевременные роды или самопроизвольное прерывание беременности.

При этом женщина может чувствовать себя удовлетворительно, даже не подозревая о проблеме. Поэтому уже на раннем сроке, рекомендуется проходить ДНК тест на определение этого белка. Особенно актуальным исследование будет:

  • для женщин, у которых отрицательный резус-фактор;
  • для предупреждения резус-конфликта, если у отца и матери ребенка разные резус-факторы;
  • если женщина отнесена в группу риска относительно резус-изосенсибилизации.

Противопоказания к проведению тестирования

Несмотря на важность этого теста, есть группа женщин, которым исследование не назначают:

  • Если у женщины с положительным резус-фактором отсутствует вероятность резус-конфликта.
  • Одноплодная беременность, начинающаяся, как многоплодная. В таком случае ДНК близнеца, находящееся в кровотоке женщины, может исказить результат.
  • Многоплодная беременность. У плодов может быть разный резус-фактор, поэтому результат нельзя считать информативным.
  • В течение предыдущих 3 месяцев женщине проводилось переливание крови или операции по трансплантации органов, в том числе костного мозга. Результат может оказаться неправильным, из-за циркуляции в этот период в крови ДНК донора.
  • Если у женщины диагностировано онкологическое заболевание.
  • В течение 3 месяцев после проведения аборта, выкидыша, внематочной или замершей беременности.

Преимущества ДНК анализа на определение резус-фактора ребенка

К преимуществам определения резус-фактора относят:

1. Высокую точность полученных результатов (до 99,9 %).

2. Безопасность. Анализ проводится неинвазивным методом, поэтому не представляет никакой опасности для плода. Исследуется венозная кровь женщины.

3. Возможность ранней диагностики резус-конфликта. Анализ может проводиться, начиная с 10 недели беременности.

Процедура проводится амбулаторно. Если у женщины резус-фактор отрицательный, ей назначают инъекции иммуноглобулина, который способен предотвратить развитие резус-конфликта. Своевременная диагностика и прием препарата позволяет плоду нормально развиваться.

Особенности определения резус-фактора и пола плода по материнской крови методом ПЦР, кому показан и когда его можно проводить?

Для неинвазивного определения резус-фактора плода используется периферическая венозная кровь беременной женщины, из которой выделяется циркулирующая в ней плодная ДНК, которая анализируется на наличие последовательности ДНК экзонов 7 и 10 гена RHD, кодирующего выработку антигена D. Исследование проводится методом ПЦР в режиме реального времени.

Как известно, концентрация ДНК плода в кровотоке беременной становится достаточной для проведения анализа, начиная с 10 недель беременности (по УЗИ). Важно отметить, что данный способ исследования ДНК плода является неинвазивным, не несет угрозы течению беременности, т.е. абсолютно безопасен как для женщины, так и для плода. Точность используемой методики составляет 96-100% и зависит от количества плодной ДНК в кровотоке беременной.

С биологической точки зрения именно RHD определяет резус-принадлежность крови человека. Обычно для резус-отрицательных людей характерно полное отсутствие гена RHD. В таких случаях результаты генотипирования совпадают с результатами обычного серологического способа определения резус-фактора крови. Однако примерно у 1% людей с серологически резус-отрицательной кровью ген RHD может присутствовать, что, как правило, связано с наличием мутации в RHD, и приводит к отсутствию или неполной экспрессии (работы) гена. В таких случаях результаты генотипирования показывают резус-положительный вариант крови, а серологически выявляется отрицательный либо слабоположительный резус-фактор. Для таких пациенток определить резус-фактор плода невозможно. Однако наблюдение за течением беременности нужно проводить по схеме ведения резус-отрицательных женщин с учетом возможности развития резус-конфликта. В любом случае после родов рекомендуется уточнить резус-фактор ребёнка серологическим методом.

В случае выявления последовательности ДНК гена RHD в крови беременной женщины с резус-отрицательной группой крови делается вывод о положительном резус-факторе плода. В таких ситуациях вероятность развития резус-конфликта и гемолитической болезни реально существует, поэтому женщине и врачам необходимо принимать все меры предосторожности в отношении развития данного грозного осложнения беременности. В целом, положительный результат теста говорит о необходимости строгого динамического контроля за уровнем соответствующих антител в крови беременной и своевременного введения антирезусного иммуноглобулина для предотвращения развития гемолитической болезни плода/новорожденного. Однако вопрос о введении препарата должен решаться только акушером-гинекологом на основании, в том числе, и других методов обследования беременной. При отсутствии антител к Rh-фактору по результатам серологического метода (ИФА) и генетически положительном резус-факторе плода, женщине рекомендуется введедние антирезусного иммуноглобулина на сроке от 28 недель беременности (для профилактики гемолитической болени новорожденного) и не позднее 72 часов после родоразрешения (для профилактики резус-конфликта при следующей беременности).

В случае отсутствия ДНК гена RHD в крови беременной делается вывод о высокой вероятности резус-отрицательной крови плода (однако для подтверждения результата рекомендуется повторить тест на более поздних сроках, но не позднее 27 недель беременности). В такой ситуации вероятность развития резус-конфликта между материнским организмом и плодом практически отсутствует, что говорит об отсутствии необходимости постоянного определения титра анти-D-антител и введения антирезусного иммуноглобулина беременной. А также в случае необходимости проведения инвазивной диагностики плода не увеличивает риски развития гемолитической болезни.

Стоит отметить, что данный анализ актуален только для тех супружеских пар, в которых реально существует угроза развития резус-конфликта при беременности, т.е. женщина обладает резус-отрицательной кровью, а мужчина – резус-положительной. При этом мужчина должен быть гетерозиготен по наличию делеции гена RHD. Только в этом случае у супружеской пары возникает 50%-ная вероятность закладки эмбриона с резус-отрицательной группой крови. Генотип мужчины можно определить, предварительно проведя ему генетический анализ определения генотипа по гену RhD (тест №2008.4).

  • Ведение беременности у женщины с резус-отрицательной кровью для своевременного расчета риска развития резус-конфликта.
  • При отсутствии в крови резус-отрицательной беременной антирезусных антител на сроке 20 недель следует провести данное исследование для принятия решения о необходимости профилактического введения женщине антирезусного иммуноглобулина.
  • Необходимость хирургического прерывания беременности у резус-отрицательной женщины с целью прогнозирования развития резус-конфликта при следующей беременности.

*ВНИМАНИЕ! Анализ имеет смысл проводить тем женщинам, мужья которых обладают резус-положительной кровью и при этом являются гетерозиготными носителями делеции в гене RHD.

Забор крови осуществляется в процедурном кабинете центра Genetico; биоматериал в пробирке с CPDA доставляется в лабораторию, где из венозной крови беременной выделяется фракция ДНК плода, которая анализируется на наличие в ней участков, характерных для гена RHD .

Для выполнения данного исследования беременной женщине нужно сдать кровь (8-10мл) из периферической вены в пробирку с консервантом CPDA.

При использовании этого типа пробирок допускается транспортировка при комнатной температуре (от +18°С до +25°С ) в течение 2 суток.

Допустим прием пищи накануне сбора биоматериала. Рекомендуется начать анализ в течение первых двух часов с момента сдачи крови.

При оформлении данной услуги желательно предоставить результаты генотипирования мужчины (будущего отца ребёнка) по гену RHD .

Кроме того, следует иметь с собой результаты предыдущего УЗИ плода (это нужно для уточнения срока беременности на момент исследования).

Забор крови осуществляется в процедурном кабинете центра Genetico; биоматериал в пробирке с CPDA доставляется в лабораторию, где из венозной крови беременной выделяется фракция ДНК плода, которая анализируется на наличие в ней участков, характерных для гена RHD .

Для выполнения данного исследования беременной женщине нужно сдать кровь (8-10мл) из периферической вены в пробирку с консервантом CPDA.

При использовании этого типа пробирок допускается транспортировка при комнатной температуре (от +18°С до +25°С ) в течение 2 суток.

Допустим прием пищи накануне сбора биоматериала. Рекомендуется начать анализ в течение первых двух часов с момента сдачи крови.

При оформлении данной услуги желательно предоставить результаты генотипирования мужчины (будущего отца ребёнка) по гену RHD .

Кроме того, следует иметь с собой результаты предыдущего УЗИ плода (это нужно для уточнения срока беременности на момент исследования).

В результате предоставляется информация об определенном молекулярно-генетически резус-факторе плода. Делается заключение о вероятности развития резус-конфликта.

В некоторых случаях в результате исследования делается вывод о невозможности установления генетического резус-фактора плода. Такое происходит при генетически резус-положительной крови женщины на фоне полученных для нее ранее серологически резус-отрицательных результатов (см. описание теста).

Кроме того, в минимальном проценте случаев может быть получен сомнительный результат. Тогда пациентку просят повторно предоставить кровь для исследования.

Ссылка на основную публикацию