Особенности определения резус-фактора и пола плода по материнской крови методом ПЦР, кому показан и когда его можно проводить?

Выявление гена RHD плода в крови матери. Резус‑фактор плода

Генетический маркер, используемый для определения резус-фактора плода по фетальной ДНК. Анализ выполняется только с 10-й недели беременности при отрицательном резус-факторе беременной женщины.

Выявление наличия/отсутствия 7-го и 10-го экзонов гена RHD; генотипирование гена RHD по фетальной ДНК.

Fetal RHD genotyping test.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь беременной женщины с серологическим отрицательным резус-фактором с 10-й недели беременности.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

С точки зрения иммунологии беременность на всём протяжении рассматривается как процесс смены этапных иммунных конфликтов. В основном эти конфликты являются нормальными физиологическими процессами и не только не оказывают патологического воздействия на организм матери и плода, но и помогают нормальному течению беременности. С их помощью реализуются такие этапы беременности, как имплантация плода, формирование гормонального фона беременности и, конечно, сами роды. Кроме того, существует ряд патологических конфликтов, которые могут существенно осложнять течение нормальной беременности, иногда приводя к летальному исходу. Одним из них является резус-конфликт между матерью и плодом.

Система резус (Rh) – одна из самых полиморфных и иммуногенных систем, известных у людей; она представлена группой белковых молекул, расположенных на поверхностной мембране эритроцитов. Наиболее изученными белками (антигенами) этой группы являются антигены D, C, c, E и e, которые кодируются генами RHD и RHCE, расположенными на хромосоме 1. Наличие в геноме гена RHD приводит к появлению на эритроцитах антигена D, что соответствует резус-положительному фенотипу (Rh+). Резус-отрицательный фенотип (Rh-) формируется в результате отсутствия обоих гомологичных аллелей гена RHD.

Важнейший фактор возникновения резус-конфликта при беременности – формирование резус-положительного плода у резус-отрицательной матери. Несмотря на то что кровоток плода и матери разделены плацентой, фрагменты клеток и ДНК плода (фетальная ДНК) могут проходить через неё. Проницаемость плаценты может увеличиваться при ряде патологических процессов: гестоз, заболевания матки, прием лекарственных препаратов, соматическая патология и т.д. При попадании в кровь матери антигенов D плода на них вырабатываются резус-антитела (RhAb). Для матери они безвредны, но, проходя обратно через плаценту, они инициируют развитие гемолитической болезни плода и новорождённого путем связывания с эритроцитами плода и последующим их разрушением. Такие состояния являются фактором риска перинатальной смертности, что подчеркивает необходимость ранних диагностических и превентивных терапевтических стратегий сохранения жизнеспособности плода.

В настоящее время существует два основных метода определения резус-фактора. Первый метод – серологический – подразумевает выявление антигена D на поверхности эритроцитов с помощью специфических антител. Он подходит для широкого рутинного обследования. К существенным ограничениям этого метода относятся: 1) необходимость наличия для исследования живых эритроцитов, что делает невозможным использование его в пренатальной диагностике резус-фактора плода; 2) наличие мутации внутри гена RHD либо изменение уровня его экспрессии. В данных случаях серологическое исследование может дать ложноотрицательный результат (Rh- при наличии гена RHD), так как диагностические антитела не смогут связаться с поврежденными или отсутствующими молекулами антигена D.

Альтернативой серологическому исследованию резус-фактора служит генотипирование на наличие или отсутствие гена RHD. В случае пренатальной диагностики в качестве материала для исследования используется фетальная ДНК, выделенная из крови матери. Генотипирование проводится по нескольким фрагментам (7-й и 10-й экзоны) гена. Необходимое условие, увеличивающим специфичность данного метода, – его использование на сроках 10 и более недель беременности у серологически резус-отрицательных женщин. Основным методом генотипирования в данном случае является полимеразная цепная реакция, выявляющя наличие или отсутствие гена RHD в материале.

С учетом того что концентрация фетальной ДНК в крови матери крайне низкая, а также с учетом возможности наличия серологического ложноотрицательного резус-фактора у матери и наличия мутаций в гене RHD генотипирование резус-фактора плода проводят, исследуя ряд показателей: 1) наличие/отсутствие не менее двух фрагментов (7-й и 10-й экзоны) гена RHD; 2) с учетом сигнала от геномной ДНК матери.

Для чего используется исследование?

Для прогнозирования развития резус-конфликта между резус-положительным плодом и резус-отрицательной матерью.
Для решения вопроса о стратегии профилактики гемолитической болезни плода и новорождённого.

Когда назначается исследование?

C 10-й недели беременности.

Что означают результаты?

В процессе исследования формируется четыре типа заключения.

1. Отсутствие обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне достаточного количества сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется отрицательный резус-фактор плода у резус-отрицательной матери. Данное состояние не требует терапевтической коррекции.

2. Наличие обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне высокого количества сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется положительный резус-фактор плода у резус-отрицательной матери. Данное состояние может вызывать резус-конфликт (особенно при повторных беременностях) и требует терапевтической коррекции. Следует отметить, что у матери должен быть серологически подтвержденный отрицательный резус.

3. Наличие обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне равного количества сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется, возможно, положительный генетически резус-фактор у матери, резус-фактор плода идентифицировать не представляется возможным.

4. Наличие слабого сигнала обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне слабого сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется сомнительный результат. Наличие слабого сигнала геномной ДНК, независимо от сигнала с обоих фрагментов гена RHD, либо наличие одного из двух фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне высокого количества сигнала геномной ДНК указывает на недостоверный результат. Во всех этих случаях требуется проведение повторного исследования.

Что может влиять на результат?

На получение достоверного результата может повлиять наличие у матери серологического ложно-отрицательного результата (Rh- при наличии гена RHD) вследствие наличия мутаций внутри гена RHD либо изменение уровня его экспрессии.
Срок исследования менее 8-10 недель беременности.
Малое количество фетальной ДНК, например при патологии плаценты.

Данное исследование должно проводиться при каждой беременности у резус-отрицательной матери.

Кто назначает исследование?

Акушер-гинеколог, терапевт, гематолог, врач ОВП.

Генетическое исследование пола плода (по крови матери)

Описание

Генетическое исследование пола плода (по крови матери) — метод диагностики пола плода, начиная с 10 недели беременности. Анализ даёт достоверный результат с точностью 90–95 %. Анализ основан на выявлении маркёра Y-хромосомы, находящейся в фетальной фракции ДНК.

Для проведения анализа необходимо предоставить копию УЗИ.

Особенности метода определения пола по крови матери
В отличие от УЗИ, которое даёт ответ на вопрос о половой идентификации ребенка, опираясь лишь на внешнее исследование плода, а также анализ его сердцебиения, кровотоков и других параметров, новая методика использует тот широкий арсенал, которым обладает ДНК малыша.

На ранних сроках беременности в крови матери имеется небольшая концентрация фетальной ДНК плода. Прежде всего, это связано с тем, что кровеносная система плода и матери являются единым целым. При этом, определение пола ребенка по крови, основывается на исследовании ДНК, содержащейся в хромосомах.

Метод определения пола по крови был разработан в 2007 году американской компанией Consumer-GeneticsInc и прошёл международную сертификацию. В настоящее время он применяется диагностическими центрами и лабораториями в США, Японии и многих странах Западной Европы. Главными достоинствами данного теста на определение пола ребенка являются — высокая точность результатов, эффективность даже на ранних сроках беременности, полная безопасность для беременной женщины и плода. Тест проводился среди женщин различного возраста из разных стран мира и доказал свою достоверность.

Порядок проведения теста на точное определение пола
Отличительной особенностью данного анализа является его абсолютная безопасность. Для исследования достаточно сдать кровь из вены, никаких дополнительных подготовок к проведению теста не потребуется. Процедура проведения анализа проводится путём забора крови из вены в процедурном кабинете нашего центра. В экстренных случаях вы можете вызвать лаборанта на дом. Далее проводится исследование фетальной ДНК, выделяемой из крови матери.

Беременность и определение пола ребёнка
Тест не является обязательной процедурой во время беременности, однако определение пола ребенка на ранних стадиях может выявить определенные риски, связанные со здоровьем новорождённого малыша. Прежде всего, это связано с опасностью унаследовать серьезные генетические заболевания, многие из которых передаются детям определённого пола. К примеру, гемофилией страдают исключительно дети мужского пола, в то время как носителем данного заболевания может быть мать будущего ребёнка. Кроме того, только у мальчиков наблюдается болезнь Клайнфельтера, проявляющаяся нетипично высоким ростом и умственной отсталостью.

Взрослые мужчины, страдающие данным заболеванием, являются бесплодными. Только детям женского пола передаются такие наследственные заболевания, как болезнь Шерешевского-Тернера, основными признаками которой являются умственная отсталость, невысокий рост, а также более низкая линия посадки волос в затылочной зоне.

Генетическое исследование пола плода (по крови матери) выполняется во всех офисах ДНКОМ.

Показания:

генетическое исследование пола плода.

Подготовка
Данный анализ выполняется строго со срока 10 эмбриональных недель, установленных результатом УЗИ (копия документа прилагается к биоматериалу).

Специальная подготовка: нет ограничений по приёму пищи и воды в день сдачи. Единственная рекомендация — за сутки до сдачи крови на данное исследование необходимо максимально ограничить общение с мужским полом (нельзя прикасаться, спать в одной постели и прочее, это касается как взрослого так и ребёнка мужского пола).

Кровь после взятия необходимо доставить в лабораторию в течение 24 часов после взятия, до отправки в лабораторию можно хранить в холодильнике при температуре 2–8 0 С, не замораживая.

Категорически запрещено открывать пробирку до и после забора крови. При оформлении необходимо заполнить направление-анкету (бланк № 14) с указанием личных и анамнестических данных: Ф.И.О., контактный телефон, срок беременности акушерский и гестационный (по зачатию), количество беременностей, наличие абортов, число родов, число выкидышей. Эти данные необходимы для формулировки заключения по результатам анализа. При отсутствии заполненной анкеты и копии УЗИ, анализ не выполняется. На данное исследование пациент подписывает “Информированное согласие на проведение исследования”.

Интерпретация результатов
Определение пола по ДНК позволяет выявить Y-хромосому.

При выявлении Y-хромосомы вам будет выдано заключение о том, что ваш будущий ребёнок будет мальчиком.

Если маркёр Y-хромосомы не обнаружен, тогда вы получите заключение о том, что у вас родится девочка. В некоторых случаях установить истину невозможно, что связано с целым рядом дополнительных факторов. К примеру, если ваш врач-гинеколог неправильно установил срок беременности: вам было выдано заключение, что у вас 9-ая неделя беременности, а на самом деле срок меньше.

На достоверность данного анализа по определению пола ребёнка влияют:

многоплодие;
индивидуальные особенности развития плода и течения беременности;
различные особенности организма женщины;
первая или повторные беременности;
пол ребёнка*.

*Ранняя стадия беременности в совокупности с низкой концентрацией фетальной ДНК младенца, могут привести к неоднозначным результатам. В этом случае специалисты нашего центра рекомендуют пройти дополнительный, уточняющий анализ на более поздних сроках. Повторный тест на определение пола по крови проводится бесплатно, если в первый раз вы проходили его в нашем центре и получили неоднозначный результат исследований. Повторный анализ проводится не ранее, чем через две недели после первичной диагностики. При этом, он является гарантией точного определения пола ребёнка. Как показывает практика, если результаты первого анализа были неоднозначными, то повторный тест дает гарантию достоверности 99%.

Особенности определения резус-фактора и пола плода по материнской крови методом ПЦР, кому показан и когда его можно проводить?

В России процент резус-сенсибилизированных женщин достигает 1,2 % (Сидельникова В.М. и соавт. 2004; Савельева Г.М. и соавт., 2004). В развитых странах мира количество женщин c Rh-сенсибилизацией равно 0,1-0,2 %. Столь низкий процент достигнут благодаря внедрению в клиническую практику специфической профилактики путем введения антирезус-иммуноглобулина несенсибилизированным резус-отрицательным женщинам. Разница в количестве сенсибилизированых женщин возникла по нескольким причинам, одна из которых – высокая стоимость антирезус-иммуноглобулина, покупать который приходится за свой счет. Хотя вводить данный препарат необходимо только тем резус-отрицательным беременным женщинам, чей плод является резус-положительным.

Вопреки мнению, что плацента образует барьер между матерью и ребенком, это не так (Loetal., 1996). Многочисленные исследования показали, что как целые клетки плода, так и внеклеточные фетальные ДНК проходят через плаценту и циркулируют в материнском кровотоке.

Интактные фетальные клетки, циркулирующие в материнском кровотоке, являются привлекательной мишенью для неинвазивной пренатальной диагностики, а именно для диагностики резус-фактора плода, пола плода и хромосомных аномалий путем простого кариотипирования. Хотя существование фетальных клеток в материнской крови известно более века, непосредственно интактные фетальные ядерные красные кровяные клетки с целью пренатальной диагностики не использовались до 1990 года. С этого времени выделение и обнаружение клеток плода из крови матери начали интенсивно исследоваться, и стали появляться различные методы выделения фетальных клеток, которые были в разной степени успешными. Однако результаты исследований были неутешительные. Это было обу- словлено недостаточностью интактных клеток плода, циркулирующих в материнском кровотоке (около 1 клетки в миллилитре материнской крови) (Bianchi и соавт., 1997), низкой эффективностью исследований (Bianchi и соавт., 1997). Хотя некоторые клетки плода (в частности ядерные красные кровяные клетки плода) имеют сравнительно короткую продолжительность жизни в материнской крови, фетальные клетки других типов могут сохраняться в материнской крови десятилетия после беременности и потенциально способны вызвать ложноположительные результаты при последующих беременностях. Таким образом, несмотря на то, что современные исследования пытаются улучшить технику сортировки клеток, большинство последних научных исследований сосредоточены на бесклеточной ДНК плода в крови матери, которая представлена в достаточном количестве (Lo и соавт.1998).

Огромное количетво человеческой ДНК расположено внутри клетки, но присутствие небольшого количества вкДНК в циркуляции и здоровых, и больных женщин было открыто в 1947 г. Хотя их биологический источник и потенциальная функция остаются неопределенными, предполагают, что это продукт апоптоза, в результате которого происходят фрагментация и выход хромосомных ДНК из клетки. Присутствие ДНК плода в материнской циркуляции была продемонстрировано Lo и соавторами в 1998 году.

Фетальные ДНК образуются путем апоптоза плацентарных клеток (трофобласта), полученных от и составляют примерно 3-6 % от общих бкДНК в материнском кровотоке в начале и конце беременности соответственно (Lo и соавт. 1998) (оставшиеся 94-97 % составляют материнские вкДНК).

ДНК плода можно обнаружить с 4-й недели гестации, хотя надежно только с 8 недели концентрация его возрастает с увеличением гестационного возраста- от 16 фетальных геномов на миллилитре крови матери в первом триместре беременности до 80 в третьем триместре) -с острым пиком в течение последних 8 недель беременности (Lo и др., 1998). В отличие от фетальных клеток, вкфДНК быстро выводится из крови матери с периодом полураспада 16 мин и не определяется через 2 ч после родов.

Цель исследования – оценить метод неинвазивной диагностики резус-фактора плода по крови беременной женщины.

Материалы и методы исследования

Для определения резус-фактора плода была использована фетальная ДНК из плазмы крови беременной резус-отрицательной женщины. В исследовании принимали участие 150 беременных резус-отрицательных женщин. Были использованы образцы венозной крови объемом 7 мл. В каждом случае женщины подписывали информированное согласие.

Для выявления гена резус-фактора применялась ПЦР в реальном времени с использованием диагностических наборов для идентификации гена резус-фактора плода в крови матери «ДНК-резус ребенка» производства ООО «Ген-технология» (Россия, РУ № ФСР2010/09565).

Определение резус-фактора плода по крови беременной резус-отрицательной женщины основывается на том, что в плазме крови беременной женщины присутствует внеклетчная фетальная ДНК.

Для правильного определения резус-фактора плода по крови беременной женщины необходимо соблюдение следующих условий:

1. Срок беременности – с 10 недель.

2. Правильное обращение с плазмой, выделение ДНК в максимально быстрые сроки.

3. Выделение ДНК с использованием надёжной технологии.

4. Организация работы в ПЦР-лаборатории согласно действующим национальным нормам.

5. Чёткое следование инструкции.

Исследование проводится в несколько этапов:

1. Взятие крови и выделение плазмы. Исследуемым материалом для проведения анализа является венозная кровь беременной резус-отрицательной женщины. Кровь сдаётся натощак, собирается в пробирку с антикоагулянтом EDTA в количестве 7-10 мл. В течение 24 ч с момента взятия крови следует отобрать плазму и перенести в новую пробирку. Плазма должна доставляться в лабораторию в течение 16-24 ч после взятия материала.

2. Выделение ДНК. Проводится колоночно-адсорбционным методом с использованием рекомендуемых комплектов наборов, предназначенных для выделения циркулирующих нуклеиновых кислот из биологических жидкостей согласно методике производителя.

3. Проведение амплификации с детекцией в режиме реального времени. Пробоподготовка – стандартная для проведения ПЦР. Подготавливаются реакции для непосредственного выявления гена резус-фактора в исследуемой пробе, а также контрольные реакции, подтверждающие правильность выполнения исследования. Реакция занимает от 1,5 до 2 часов (в зависимости от скорости изменения температуры амплификатором).

4. Регистрация и учёт результатов анализа.

Результаты исследования и их обсуждение

Все 150 женщин, вступившие в исследование, были резус-отрицательные по результатам серологического анализа. Для 115 из них стал известен резус-фактор рожденного ребенка.

Резус-фактор рожденных детей оценивался серологическим методом в роддоме.

ДНК-анализ 76 образцов указал на положительный резус-фактор плода, в 39 случаях был установлен отрицательный резус-фактор. Результаты анализа были подтверждены анализом крови детей после их рождения. В одном случае результат анализа не совпал (при отрицательном резус-факторе по данным тест-системы фактический резус-фактор оказался резус-положительным). Следует отметить, что срок беременности для этой пациентки составил 9 недель, в то время, как минимальным сроком, гарантирующим правильность результатов анализа, является срок 10 недель. Следовательно, данный результат не может использоваться при оценке аналитических характеристик тест-системы. У двух детей резус фактор был определен неправильно в роддоме. После полученния результата анализа на определение резус-фактора этих детей, не совпадающего с нашими результатами, у них был взят буккальный соскоб и проведено генетическое определение резус-фактора. Результат данного анализа подтвердил правильность определеного нами резус-фактора плода по крови беременной женщины.1,8 % (2 ребенка) – неправильное определение резус-фактора детей в роддоме

Таким образом, чувствительность и специфичность применяемого метода диагностики составили 100 %.

Выводы

– новые диагностические наборы для идентификации гена резус-фактора (RHD) «ДНК-резус ребенка» российского производства можно рекомендовать для внедрения в медицинскую практику акушерам-гинекологам для ранней неинвазивной диагностики резус-фактора по крови беременной женщины;- определение резус-фактора на раннем сроке беременности позволяет избежать дорогой медикаментозной профилактики;

– введение антирезус-иммуноглобулина всем резус-отрицательным женщинам, беременным резус-положительным плодом, в дальнейшем приведет к снижению процента резус-сенсибилизированных женщин в России.

Рецензенты:

Шатунова Е.П., д.м.н., доцент, заведующая отделением гинекологии Клиник Сам ГМУ, г. Самара;

Шляпников М.Е., д.м.н., доцент, зам. главного врача по акушерству и гинекологии ММБУ ГКБ№ 2 им. Н.А. Семашко, г. Самара.

Тест на определение пола и резус-фактора ребенка в Москве

Резус-фактором называют белок, который синтезируется на поверхности эритроцитов. Если он отсутствует, то говорят об отрицательном резус-факторе.

Согласно статистике, этот белок не производится у каждого 7 жителя планеты. Если резус-фактор беременной женщины отличается от того, который будет у малыша, возможен резус-конфликт. Такое состояние может негативно отразиться на течении беременности или даже стать причиной ее прерывания. Чтобы этого избежать, будущей маме лучше заранее узнать резус-фактор будущего малыша.

Технология исследования резус-фактора по ДНК матери

Не так давно, чтобы узнать резус-фактор ребенка, нужно было проводить крайне опасную процедуру забора его крови инвазивным методом. Поэтому назначали проведение анализа исключительно в экстренных ситуациях.

Сегодня для процедуры делается забор венозной крови у будущей мамы. Исследование проводится методом ПЦР. В результате удается определить не только резус-фактор, но и группу крови малыша.

Информационный тест ДНК на определение резус-фактора ребенка выполяется в течении:

стандартное исследование — от 1 до 5 рабочих дней;

О предположительной дате выдачи результатов лаборатория сообщает в день получения образцов.

Оплатить анализ ДНК можно у представителя лаборатории в Вашем городе, где вы будете сдавать кровь

В каких случаях определяют резус-фактор плода

Если у мамы и будущего ребенка окажутся разные резус-факторы, возможно развитие таких осложнений:

гемолитическая болезнь плода;
нарушение развития внутренних органов и нервной системы у плода;
преждевременные роды или самопроизвольное прерывание беременности.

При этом женщина может чувствовать себя удовлетворительно, даже не подозревая о проблеме. Поэтому уже на раннем сроке, рекомендуется проходить ДНК тест на определение этого белка. Особенно актуальным исследование будет:

для женщин, у которых отрицательный резус-фактор;
для предупреждения резус-конфликта, если у отца и матери ребенка разные резус-факторы;
если женщина отнесена в группу риска относительно резус-изосенсибилизации.

Противопоказания к проведению тестирования

Несмотря на важность этого теста, есть группа женщин, которым исследование не назначают:

Если у женщины с положительным резус-фактором отсутствует вероятность резус-конфликта.
Одноплодная беременность, начинающаяся, как многоплодная. В таком случае ДНК близнеца, находящееся в кровотоке женщины, может исказить результат.
Многоплодная беременность. У плодов может быть разный резус-фактор, поэтому результат нельзя считать информативным.
В течение предыдущих 3 месяцев женщине проводилось переливание крови или операции по трансплантации органов, в том числе костного мозга. Результат может оказаться неправильным, из-за циркуляции в этот период в крови ДНК донора.
Если у женщины диагностировано онкологическое заболевание.
В течение 3 месяцев после проведения аборта, выкидыша, внематочной или замершей беременности.

Преимущества ДНК анализа на определение резус-фактора ребенка

К преимуществам определения резус-фактора относят:

1. Высокую точность полученных результатов (до 99,9 %).

2. Безопасность. Анализ проводится неинвазивным методом, поэтому не представляет никакой опасности для плода. Исследуется венозная кровь женщины.

3. Возможность ранней диагностики резус-конфликта. Анализ может проводиться, начиная с 10 недели беременности.

Процедура проводится амбулаторно. Если у женщины резус-фактор отрицательный, ей назначают инъекции иммуноглобулина, который способен предотвратить развитие резус-конфликта. Своевременная диагностика и прием препарата позволяет плоду нормально развиваться.

Определение резус – фактора плода

Синонимы: Rh – фактор, неинвазивная диагностика резус – фактора плода.

Связанные тесты: определение титра резус – антител (наличие D-антигена на эритроцитах крови).

Определение резус – фактора плода методом ПЦР в режиме реального времени заключается в обнаружении гена RHD, кодирующего D – антиген. Присутствие D – антигена на поверхности эритроцитов определяет положительный резус – фактор (Rh+). Неинвазивная пренатальная диагностика не представляет угрозы течению беременности, так как материалом для исследования служит кровь матери.

При планировании, постановке на учет по беременности всем женщинам определяют резус – фактор. Резус – фактор будущей матери имеет большое значение для успешного вынашивания и рождения ребенка. Если у женщины определяется отрицательный резус – фактор, а у мужчины – положительный резус – фактор, то имеется высокая вероятность наличия у ребенка данной пары положительного резус – фактора.

В таких случаях, во время беременности кровь плода попадает в кровоток матери, в ее организме начинают вырабатываться антитела, так как антигены на эритроцитах резус – положительного плода воспринимаются организмом матери чужеродными. В дальнейшем образующиеся антитела матери через плаценту проникают в кровоток плода, что приводит развитию резус – конфликта. Материнские антитела могут вызывать разрушение (гемолиз) эритроцитов плода. Гемолиз во время беременности может привести к гемолитической болезни плода и новорожденного, характеризующейся тяжелой анемией.

Фактором риска развития резус – конфликта являются как предшествующие беременности резус – положительным плодом, аборты, кесарево сечение, так и травмы органов брюшной полости, переливание крови. В случае если первая беременность была резус – положительным плодом (в отсутствие введения антирезусного иммуноглобулина) существует высокая вероятность того, что организм женщины сенсибилизирован и возможен риск развития гемолитической болезни плода.

Ведение беременности, угрожаемой по резус – конфликту, требует особого внимания от врача, поскольку он может возникать на любом этапе беременности. Поэтому на первое место выходит важность раннего определения точного статуса плода по резус – фактору.

В каких случаях рекомендуется проводить исследование?

ведение беременности у женщины с отрицательным резус – фактором для своевременного расчета риска развития резус – конфликта;
отсутствие в крови беременной женщины с отрицательным резус – фактором на сроке 20 недель антител к D – антигену плода перед профилактическим введением иммуноглобулина.

Используемый метод исследования

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени.

Материал для исследования

Подготовка к исследованию

Исследование проводится натощак; между последним приёмом пищи и взятием крови должно пройти не менее 6 часов.

Просим обратить Ваше внимание!

Точность результата зависит от количества ДНК плода, обнаруживаемой в материнской плазме. Данная величина обусловлена состоянием плаценты, индексом массы тела женщины и возрастает с увеличением срока беременности. Начиная с 10 недели беременности, диагностика методом ПЦР позволяет проводить исследование фетальной ДНК с точностью до 96–98%.

Формат выдачи результата:

Резус – фактор плода положительный / Резус – фактор плода отрицательный

Цены на неинвазивную пренатальную диагностику

Исследования	Стоимость, руб.	Срок выполнения
Определение мультикопийного фрагмента Y хромосомы плода в крови беременной женщины (Пол плода)	78,7	До 7 дней
Определение RHD гена плода в крови беременной женщины (Резус-фактор плода)	94,97	До 7 дней

ООО «Биомедика Плюс»

220068, Республика Беларусь,
г. Минск, ул. Червякова 64
E-mail: mail@biomedica.by

Лицензия №02040/6344 от 26 марта 2010г

Время работы центра:

Понедельник – пятница:
08:00 – 20:00
Суббота: 08:00 – 16:00
Воскресенье: выходной

Почему во время беременности важно узнать резус-фактор ребенка?

В Генетической клинике НИИ медицинской генетики Томского НИМЦ проводится выявление гена RHD плода в крови матери методом ПЦР в режиме реального времени.

Резус-фактор плода

С первых недель беременности между плодом и организмом матери устанавливаются сложные взаимодействия, которые оказывают значительное влияние на дальнейшее течение беременности и развитие плода.

Порядка 98% случаев гемолитической болезни новорождённого развивается вследствие иммунологической несовместимости резус-положительного (Rh+) плода и резус-отрицательной (Rh-) матери. Попадая в кровь (Rh-) матери, наиболее иммуногенный D-резус-антиген, присутствие которого на поверхности эритроцитов определяет положительный резус-фактор (Rh+), вызывает образование специфических антител, которые проникают через плаценту, разрушают эритроциты плода, что влечёт за собой развитие гемолитической болезни новорожденных.

При раннем проявлении резус-конфликт может быть причиной преждевременных родов или выкидышей.

Сенсибилизация матери к D-антигену и риск развития резус-конфликта возрастают с каждой последующей беременностью. Распространенность индивидов носителей D-антигена, определяющего положительный резус-фактор (Rh+), составляет приблизительно 86 %, соответственно, доля резус-отрицательных лиц (Rh-), не имеющих антигена D – около 14 %.

Определение резус-фактора плода в крови матери методом ПЦР в режиме реального времени заключается в выявлении гена RHD, кодирующего D-антиген. Для выполнения анализа необходима кровь беременной женщины.

Важно отметить, что данный способ исследования ДНК плода (фетальных ДНК или фетДНК) является неинвазивным, не несет угрозы течению беременности и абсолютно безопасен как для будущей мамы, так и для ребенка. Фетальная ДНК обнаруживается в крови беременной женщины, её количество возрастает с увеличением срока гестации, зависит от состояния плаценты и особенностей течения беременности. Поэтому исследование для прогнозирования развития резус-конфликта и гемолитической болезни плода рекомендовано начиная с 8-10 недель беременности, что определяет точность проводимого пренатального молекулярно-генетического исследования с использованием фетДНК до 96-100 %.

Показания к проведению исследования:

– Ведение беременности у женщин с отрицательным резус-фактором для своевременного расчёта риска развития резус-конфликта;

– Отсутствие в крови беременной женщины с отрицательным резус-фактором антител к D-антигену плода перед профилактическим введением иммуноглобулина;

– Хирургическое прерывание беременности у женщины с отрицательным резус-фактором, с целью прогнозирования развития резус-конфликта при последующих беременностях.

Подготовка к анализу:

Забор крови производится утром натощак или в течение дня, не ранее, чем через 3 часа после приема пищи.

Проведение исследования возможно не ранее 10 акушерских недель беременности при одноплодной беременности.

Желательно иметь с собой результаты УЗИ плода (для уточнения срока беременности на момент исследования).

Ограничения методики:

Трансплантация органов, тканей и стволовых клеток.

Наличие онкологических заболеваний.

Переливание крови менее чем за 3 месяца.

Если пациентка принимает низкомолекулярный гепарин, то с момента последней инъекции должно пройти не менее 12 часов.

Беременность, которая завершилась меньше 3 месяцев назад.

Интерпретация результатов:

Результат лабораторного исследования не является диагнозом. Интерпретация результатов лабораторных исследований, тактика обследования, а также назначение лечения пациентам определяется лечащим акушером-гинекологом.

В результате исследования предоставляется информация о предполагаемом резус-факторе плода.

Кроме того, в минимальном проценте случаев может быть получен сомнительный результат. Тогда пациентку просят повторно предоставить кровь для исследования.

Неопределенный результат:

В случае недостаточного для анализа количества фетДНК плода в крови матери рекомендуется повторная сдача анализа через 1-2 недели, когда уровень фетДНК плода в крови матери возрастет. Такие ситуации могут быть связаны с физиологическими особенностями беременной женщины (например, при большой массе тела беременной снижается процентное соотношение фетДНК плода к свободной циркулирующей ДНК матери).

Помимо этого, существует небольшой процент женщин, у которых есть мутация в гене RHD, что приводит к снижению выработки белка или изменению его функциональных свойств. Серологически статус таких женщин определяется как резус-отрицательный, хотя генотипически это резус-положительные женщины. При таких особенностях генотипа матери определить резус-принадлежность плода невозможно.

Получить более подробную информацию, а также записаться на сдачу анализа можно по телефону 8 (3822) 530-537.

ХРОМОСОМНЫЕ НАРУШЕНИЯ ПЛОДА ПО КРОВИ МАТЕРИ

Что такое неинвазивный пренатальный ДНК-тест и почему его делают при беременности?

Современный уровень развития медицины позволяет женщине узнать, здоров ли ее ребенок, когда тот еще находится в утробе. Этот вопрос является главным для всех будущих родителей, а порой он стоит настолько остро, что в пренатальной диагностике появляется неотложная необходимость.

ЧТО ЭТО ТАКОЕ?

Неинвазивный пренатальный ДНК-тест (сокращенно НИПТ) – относительно новая методика обследования беременных.

Неинвазивный метод позволяет сделать анализ на генетические отклонения у плода по крови (из вены) матери. С 9 недели беременности в кровь женщины в небольшом количестве проникают кровяные клетки плода. Именно их выделяют из общей массы, обнаруживают ДНК и проводят подробный генетический анализ.

Этот метод дает точный ответ на вопрос, здоров ли ребенок. НИПТ относится к одним из самых точных исследований в акушерстве.

ГРУППЫ РИСКА

Необходимость провести исследование генетического здоровья будущего ребенка может возникнуть даже у здоровых мамы и папы, если оба родителям или один из них входит в так называемую группу риска по генетическим патологиям. Безусловно, вопрос здоровья ребенка заботит любую беременную, и любая может сделать НИПТ по собственному желанию, для этого не нужно иметь направление от генетика или особые основания. Но есть категории будущих мам, которым такое тестирование наиболее желательно провести.

Если базовый обязательный скрининг показал у женщины высокие риски рождения малыша с синдромом Дауна, синдромом Патау или другими хромосомными патологиями, неинвазивные методы станут достойной альтернативой травматичным инвазивным способам установить истину. В случае получения результата отрицательного, женщина может не беспокоиться и не соглашаться ни на какие инвазивные методы.

Неинвазивный тест желательно сделать женщинам, у которых прежняя беременность завершилась рождением ребенка с хромосомными отклонениями, выкидышем на раннем сроке, замиранием на любом сроке. С возрастом женщин стареют и яйцеклетки, ухудшается их репродуктивное качество, а потому риски рождения детей с генетическими аномалиями тем выше, чем выше возраст беременной. Всем женщинам старше 35 лет, которые собираются родить ребенка, желательно сделать такой тест.

Женщинам, которые не уверены в отцовстве, а также женщинам, которые состоят в близкородственном браке, тест не просто желателен, а необходим. Не будет лишним пройти обследование и в том случае, если в роду были случаи рождения детей с генетическими проблемами как со стороны мужчины, так и со стороны женщины.

Стоит провести подобную диагностику и тогда, когда у мамы или папы в анамнезе есть пусть даже пролеченная алкогольная или наркозависимость – длительные вредные привычки приводят к мутациям определенных генов, ухудшению качества яйцеклеток и сперматозоидов, что нередко приводит к развитию нарушений хромосомного набора ребенка.

ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ

Тестирование не проводят женщинам, срок беременности которых менее 9 акушерских недель. В женской крови до этого срока кровяные клетки плода не определяются, материала для исследования ДНК добыть не получится.

Если женщина беременна двойней, тест делать можно, но вот при многоплодной беременности тройней в проведении диагностики откажут, слишком сложно будет идентифицировать ДНК каждого из плодов.

Такая диагностика мало чем поможет семейным парам, которые вынуждены были прибегнуть к помощи суррогатной матери. По крови женщины, которая не является истинной биологической матерью, не удастся безошибочно идентифицировать ДНК малыша. Если беременность наступила в результате ЭКО с применением донорской яйцеклетки, тестирование также невозможно.

Женщине будет отказано в неинвазивном ДНК-тестировании и в том случае, если недавно она перенесла трансплантацию костного мозга, ей проводилось переливание крови. Всем остальным анализ проведут.

Проведение исследования и подготовка к нему

От беременной не требуется никакой подготовки. Нужно записаться на прием в ООО «Симилия» и прийти к назначенному времени. Для исследования берут самый обыкновенный анализ крови из вены (не более 20 мл).

Может ли тест не получиться? Теоретически, конечно, может, ведь делают его люди, а человеческий фактор очень непредсказуем. Но в этом случае беременную вызовут на повторный забор крови.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Тестирование определяет вероятность наличия у ребенка синдромов Дауна, Тернера, Эдвардса и Патау.

Если женщина вынашивает одного ребенка, список аномалий, на которые будет исследован биоматериал, шире. При двойне заключение будет включать в себя только синдром Дауна, Эдвардса и Патау, а точнее, вероятность того, что такие аномалии есть у одного или двух детей.

Дополнительно неинвазивный пренатальный ДНК-тест с огромной точностью определяет пол ребенка, а также его резус-фактор и группу крови, что может быть очень важно в случае риска гемолитической болезни плода, которая развивается из-за иммунного отторжения организмом резус-отрицательной беременной ребенка с положительным резус-фактором крови.

В среднем, точность результата пренатального неинвазивного теста составляет около 98-99%. Заметьте, это не 100%, но и не те 70%, которые «дает» общий скрининг в женской консультации.

Трактовка результатов не вызовет вопросов у женщины и членов ее семьи. Если ребенок здоров, риски будут оценены в 0,1 – 1%. Отзывы врачей об этом исследовании довольно положительные, вероятность получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов ничтожно мала.

Плюсы и минусы

Пренатальный тест дает уникальную возможность выявить вероятные аномалии в развитии крохи рекордно рано. В анализе крови матери определяют ДНК плода со срока в 9-10 недель. На таком сроке не проводится обязательный скрининг. Поэтому тестирование дает возможность получить информацию о состоянии малыша еще до прохождения скрининговых исследований первого триместра. Некоторые женщины, сделавшие тест и убедившиеся, что ребенок здоров, от скрининга в консультации с чистой совестью отказываются вообще.

Новое слово в пренатальной генетической диагностике – возможность определить пол ребенка на таком раннем сроке, на каком это не может сделать никакое современное УЗИ. При этом точность определения пола будет 99%, а на УЗИ больше 80% достоверности не даст никто.

Спокойствие во время беременности, уверенность в том, что с малышом все хорошо, очень нужны будущей матери. Ведь из-за переживаний могут развиться самые различные осложнения беременности. Пренатальные тесты дают такое спокойствие и уверенность.