Определение Т-лимфоцитов, что это такое, применение в диагностике и лечении

Ученые оценили эффективность другого способа защиты человека от COVID-19

Отрицательный анализ на антитела к вирусу SARS-CoV-2 не означает, что человек не болел коронавирусной инфекцией, у таких людей отпор вирусу могли дать Т-лимфоциты, рассказал РБК заведующий лабораторией трансплантационной иммунологии Национального медицинского исследовательского центра (НМИЦ) гематологии Минздрава Григорий Ефимов.

По его словам, чем легче перенес коронавирус человек, тем выше вероятность того, что у него не будут выявлены антитела. Об этом уже свидетельствуют данные нескольких научных работ, в том числе исследование, организованное на базе НМИЦ гематологии совместно с учеными из других российских университетов, говорит Ефимов.

В исследовании, результаты которого уже были опубликованы в авторитетном американском журнале Immunity, принимали участие сотрудники и студенты МГУ и НМИЦ гематологии. Всего, по словам Ефимова, это 34 переболевших добровольца и две группы здоровых доноров по 14 и десять человек.

«Мы изучали, как у них устроен антительный и Т-клеточный [иммунный] ответ. У подавляющей части переболевших, у которых нет антител, есть Т-клеточный ответ. В другом исследовании мы набирали специально людей без антител, которые были в тесном контакте с больными, они не заболели сами и антител не выработали, и выяснили: у большего процента среди них есть Т-лимфоциты», — рассказал Ефимов РБК, пояснив, что последняя категория, вероятнее всего, перенесла COVID-19 без симптомов.

Immunity — это ежемесячный журнал, в котором публикуются статьи и обзоры научных работ по иммунологии. Согласно данным рейтинга SCImago Journal & Country Rank, созданного на основании базы научных работ Scopus, журнал выходит в категорию Q1, которая присваивается лучшим научным журналам по всем ученым дисциплинам. Индекс Хирша для издания равен 377.

Т-лимфоциты (Т-клетки) — белые тельца в крови человека, которые способствуют выработке антител и уничтожают вирусные клетки. Этот механизм лежит в основе иммунной защиты организма и первым включается в борьбу с враждебными инфекционными агентами.

Однако, как пояснил Ефимов, в механизме работы антител и Т-лимфоцитов есть существенные отличия. Так, например, со временем антитела исчезают из организма человека, а вместе с этим исчезает и их защитная функция. В отличие от неживых молекул антител, Т-лимфоциты — живые, они способны делиться. «Из них значительная часть также погибнет, но какая-то часть останется в виде клеток памяти. Эти клетки, судя по другим инфекциям, существуют десятилетиями. Как в случае с вирусом, который стал причиной атипичной пневмонии в 2003 году, у людей до 2020 года сохраняются T-лимфоциты, которые распознают этот вирус», — пояснил Ефимов.

Важный вопрос, ответ на который сейчас ищут иммунологи всего мира, насколько приобретенные таким образом Т-лимфоциты способны защищать человека от COVID-19. По его словам, такое исследование сейчас ведет НМИЦ гематологии Минздрава при поддержке Российского научного фонда.

В целом, по словам Ефимова, выявить Т-клеточный иммунитет сложнее, чем антитела. «Нужны живые клетки, с ними нужно бережно обращаться, нужно специальное лабораторное оборудование, по времени занимает дольше, и это гораздо дороже стоит», — рассказал ученый.

Говорить о том, у какого числа испытуемых появился Т-клеточный ответ, пока преждевременно, считает Ефимов, так как пока российское исследование проводилось на небольшой выборке. «У нас была другая задача: мы смотрели глубже, какие фрагменты вируса распознаются. Задача была не статистическая, для этого нужен другой инструмент», — пояснил заведующий лабораторией трансплантационной иммунологии НМИЦ гематологии.

Также, по его словам, числа испытуемых недостаточно, чтобы делать выводы о том, у какого числа людей Т-лимфоцитный ответ был успешным и позволил побороть коронавирусную инфекцию. «Если мы не видим Т-лимфоцитов, это не значит, что их нет. Мы смотрим на набор из трех структурных белков, которые входят в состав вирусных частиц, но их существует больше», — пояснил Ефимов.

Усилить Т-лимфоцитную защиту можно с помощью вакцинации, считает Ефимов. По его словам, исследования вакцин от коронавирусной инфекции, которые сейчас идут, демонстрируют, что они стимулируют и Т-клеточный ответ. А вот «разогнать» Т-лимфоциты с помощью лекарств вряд ли возможно, отмечает эксперт.

Зарубежные исследования о Т-клеточном иммунитете

Исследованием клеточного ответа на SARS-CoV-2 занимаются не только в России. Одна из последних научных работ на эту тему вышла в Великобритании, это исследование Бирмингемского университета, Службы общественного здравоохранения Англии (подразделение британского Минздрава, Public Health England) и Манчестерского клинического исследовательского центра NIHR. Ученые собрали образцы сыворотки и крови у когорты более чем из 2 тыс. медицинских работников, в том числе у 100 человек с положительными тестами на COVID-19.

У всех 100 человек наблюдались легкие или умеренные симптомы или бессимптомное течение болезни. Образцы сыворотки собирали ежемесячно для измерения уровней антител, а образцы крови брали через шесть месяцев для оценки Т-клеточного ответа. Проведение этих клеточных анализов намного сложнее и дороже, чем исследования антител, и сейчас это исследование с участием 100 человек является одним из крупнейших в этой области, писал Bloomberg.

Работа британских ученых показала, что у всех 100 испытуемых выработался специфический ответ на ряд белков коронавируса SARS-CoV-2, который сохранялся и спустя полгода. У тех, у кого были симптомы, уровень иммунного ответа был как минимум на 50% выше, чем у тех, кто перенес заболевание беcсимтомно. Работа пока не была опубликована в научных журналах и не подвергалась рецензированию.

Еще одно исследование, подтверждающее теорию о том, что высокий уровень T-лимфоцитов в крови может обеспечить достаточную защиту от коронавирусной инфекции, было также проведено Агентством по общественному здравоохранению Англии совместно с компанией Oxford Immunotec. Эта компания специализируется на разработке и производстве тест-систем для выявления заболеваний иммунной системы и инфекционных заболеваний. Самый известный продукт компании — тест-системы для диагностики туберкулеза T-SPOT, которые выявляют реакцию Т-клеток на возбудителя болезни. Эти системы одобрены для использования в 50 странах мира, в том числе в США, Европе, Японии и России.

Исследование, которое проводили на выборке почти 3 тыс. человек, пока также существует в стадии препринта, то есть не было опубликовано в научных журналах и не подвергалось рецензированию, сообщал Reuters. Однако согласно выводам авторов этой работы, у людей с высоким Т-клеточным иммунным ответом симптомы инфицирования SARS-CoV-2 не развивались. В то же время инфекция подтвердилась у 20 участников тестов с низким ответом T-лимфоцитов. Уровень Т-лимфоцитов, способных противостоять новому коронавирусу, снижается с возрастом. Это может объяснить, почему пожилые люди больше подвержены риску заражения COVID-19, считают авторы исследования.

Оценка показателей клеточного иммунитета

Первым исследованием всегда является подсчет лейкоцитарной формулы (см. главу «Гематологические исследования»). Оцениваются как относительные, так и абсолютные значения количества клеток периферической крови.

Определение основных популяций (Т-клетки, В-клетки, натуральные киллеры) и субпопуляций Т-лимфоцитов (Т-хелперы, Т-ЦТЛ). Для первичного исследования иммунного статуса и выявления выраженных нарушений иммунной системы ВОЗ рекомендовано определение CD3, CD4, CD8, CD19, CD16+56, соотношение CD4/CD8. Исследование позволяет определить относительное и абсолютное количество основных популяций лимфоцитов: Т-клетки – CD3, В-клетки – CD19, натуральные киллеры (NK) – CD3- CD16++56+, субпопуляции Т лимфоцитов (Т-хелперы CD3+ CD4+, Т-цитотоксические CD3+ CD8+ и их соотношение).

Метод исследования

Иммунофенотипирование лимфоцитов проводится c использованием моноклональных антител к поверхностным дифференцировочным ангинам на клетках иммунной системы, методом проточной лазерной цитофлуорометрии на проточных цитофлуориметрах.

Выбор зоны анализа лимфоцитов производится по дополнительному маркеру CD45, который представлен на поверхности всех лейкоцитов.

Условия взятия и хранения образцов

Венозная кровь, взятая из локтевой вены, утром, строго натощак, в вакуумную систему до указанной на пробирке метки. В качестве антикоагулянта используется К2ЭДТА. После взятия пробирку с образцом медленно переворачивают 8-10 раз для перемешивония крови с антикоагулянтом. Хранение и транспортировка строго при 18–23°С в вертикальном положении не более 24 ч.

Невыполнение этих условий приводит к некорректным результатам.

Интерпретация результатов

Т-лимфоциты (CD3+ клетки). Повышенное количество свидетельствует о гиперактивности иммунитета, наблюдается при острых и хронических лимфолейкозах. Увеличение относительного показателя встречается при некоторых вырусных и бактериальных инфекциях в начале заболевания, обострениях хронических заболеваний.

Снижение абсолютного количества Т-лимфоцитов свидетельствует о недостаточности клеточного иммунитета, а именно о недостаточности клеточно-эффекторного звена иммунитета. Выявляется при воспалениях разнообразной этиологии, злокачественных новообразованиях, после травмы, операций, инфаркта, при курении, приеме цитостатиков. Повышение их числа в динамике заболевания – клинически благоприятный признак.

В-лимфоциты (CD19+ клетки) Снижение наблюдается при физиологических и врожденных гипогаммаглобулинемиях и агаммаглобулинемиях, при новообразованиях иммунной системы, лечении иммунодепрессантами, острой вирусной и хронической бактериальной инфекциях, состоянии после удаления селезенки.

Увеличение отмечается при аутоиммунных заболеваниях, хронических заболеваниях печени, циррозе, муковисцедозе, бронхиальной астме, паразитарных и грибковых инфекциях. Характерно в период реконвалесценции после перенесенных острых и хронических вирусных и бактериальных инфекций. Выраженное увеличение наблюдается при хроническом В-лимфолейкозе.

NK-лимфоциты с фенотипом CD3-CD16++56+ Натуральные киллеры (NK-клетки) – популяция больших гранулярных лимфоцитов. Они способны лизировать клетки-мишени, инфицированные вирусами и другими внутриклеточными антигенами, опухолевые клетки, а также другие клетки аллогенного и ксеногенного происхождения.

Увеличение количества NK-клеток связано с активацией антитрансплантационного иммунитета, в некоторых случаях отмечается при бронхиальной астме, встречается при вирусных заболеваниях, повышается при злокачественных новообразованиях и лейкозах, в периоде реконвалесценции.

Снижение наблюдается при врожденных иммунодефицитах, паразитарных инфекциях, аутоиммунных заболеваниях, облучении, лечении цитостатиками и кортикостероидами, стрессе, дефиците цинка.

Т-лимфоциты хелперы с фенотипом CD3+CD4+ Увеличение абсолютного и относительного количества наблюдается при аутоиммунных заболеваниях, может быть при аллергических реакциях, некоторых инфекционных заболеваниях. Это увеличение свидетельствует о стимуляции иммунной системы на антиген и служит подтверждением гиперреактивных синдромов.

Снижение абсолютного и относительного количества Т-клеток свидетельствует о гипореактивном синдроме с нарушением регуляторного звена иммунитета, является патогномичным признаком для ВИЧ-инфекции; встречается при хронических заболеваниях (бронхитах, пневмониях и т.д.), солидных опухолях.

Т-цитотоксические лимфоциты с фенотипом CD3+ CD8+ Повышение выявляется практически при всех хронических инфекциях, вирусных, бактериальных, протозойных инфекциях. Является характерным для ВИЧ-инфекции. Снижение наблюдается при вирусных гепатитах, герпесе, аутоиммунных заболеваниях.

Соотношение CD4+/CD8+ Исследование соотношения CD4+/CD8+ (CD3, CD4, CD8, CD4/CD8) рекомендовано только для мониторинга ВИЧ-инфекции и контроля эффективности АРВ терапии. Позволяет определить абсолютное и относительное количество Т-лимфоцитов, субпопуляций Т-хелперов, ЦТЛ и их соотношение.

Диапазон значений – 1,2–2,6. Снижение наблюдается при врожденных иммунодефицитах (синдром Ди-Джоржи, Незелофа, Вискотта-Олдрича), при вирусных и бактериальных инфекциях, хронических процессах, воздействии радиации и токсических химических веществ, множественной миеломе, стрессе, снижается с возрастом, при эндокринных заболеваниях, солидных опухолях. Является патогномичным признаком для ВИЧ-инфекции (менее 0,7).

Увеличение значения более 3 – при аутоиммунных заболеваниях, остром Т-лимфобластном лейкозе, тимоме, хроническом Т-лейкозе.

Изменение соотношения может быть связано с количеством хелперов и ЦТЛ у данного пациента. Например, снижение количества CD4+ Т-клеток при острой пневмонии в начале заболевания ведет к снижению индекса, а ЦТЛ при этом могут не измениться.

Для дополнительного исследования и выявления изменений иммунной системы при патологиях требующих оценки наличия острого или хронического воспалительного процесса и степени его активности, рекомендуется включать подсчет количества активированных Т-лимфоцитов с фенотипом CD3+HLA-DR+ и ТNK–клеток с фенотипом CD3+CD16++56+.

Т-активированные лимфоциты с фенотипом CD3+HLA-DR+ Маркер поздней активации, показатель гиперреактивности иммунитета. По экспрессии данного маркера можно судить о выраженности и силе иммунного ответа. Появляется на Т-лимфоцитах после 3-го дня острого заболевания. При благоприятном течении заболевания снижается до нормы. Увеличение экспрессии на Т-лимфоцитах может быть при многих заболеваниях, связанных с хроническим воспалением. Отмечено его повышение у пациентов с гепатитом С, пневмониями, ВИЧ-инфекцией, солидными опухолями, аутоиммунными заболеваниями.

ТNK-лимфоциты с фенотипом CD3+CD16++CD56+ Т-лимфоциты, несущие на своей поверхности маркеры CD16++ CD 56+. Эти клетки имеют свойства как Т-, так и NK-клеток. Исследование рекомендовано как дополнительный маркер при острых и хронических заболеваниях.

Снижение их в периферической крови может наблюдаться при различных органоспецифических заболеваниях и системных аутоиммунных процессах. Увеличение отмечено при воспалительных заболеваниях разной этиологии, опухолевых процессах.

Исследование ранних и поздних маркеров активации Т-лимфоцитов (CD3+CD25+, CD3-CD56+, CD95, CD8+CD38+) дополнительно назначают для оценки изменений ИС при острых и хронических заболеваниях, для диагностики, прогноза, мониторинга течения заболевания и проводимой терапии.

Т-активированные лимфоциты с фенотипом CD3+CD25+, рецeптор к ИЛ2 CD25+ – маркер ранней активации. О функциональном состоянии Т-лимфоцитов (CD3+) свидетельствует количество экспрессирующих рецепторов к ИЛ2 (CD25+). При гиперактивных синдромах количество этих клеток возрастает (острые и хронические лимфолейкозы, тимома, отторжение трансплантата), кроме того, повышение их может свидетельствовать о ранней стадии воспалительного процесса. В периферической крови их можно выявить в первые три дня болезни. Снижение числа этих клеток может наблюдаться при врожденных иммунодефицитах, аутоиммунных процессах, ВИЧ-инфекции, грибковых и бактериальных инфекциях, ионизирующей радиации, старении, отравлении тяжелыми металлами.

Т-цитотоксические лимфоциты с фенотипом CD8+CD38+ Присутствие CD38+ на ЦТЛ лимфоцитах отмечено у пациентов с разными заболеваниями. Информативный показатель при ВИЧ-инфекции, ожоговой болезни. Увеличение числа ЦТЛ с фенотипом CD8+CD38+ наблюдается при хронических воспалительных процессах, онкологических и некоторых эндокринных заболеваниях. При проведении терапии показатель снижается.

Субпопуляция натуральных киллеров с фенотипом CD3- CD56+ Молекула CD56 – адгезивная молекула, широко представленная в нервной ткани. Кроме натуральных киллеров, экспрессируется на многих типах клеток, в том число на Т-лимфоцитах.

Увеличение данного показателя свидетельствуют о расширении активности специфического клона клеток киллеров, которые имеют меньшую цитолитическую активность, чем NK-клетки с фенотипом CD3- CD16+. Количество этой популяции возрастает при гематологических опухолях (ЕК-клеточная или Т-клеточная лимфома, плазмоклеточная миелома, апластическая крупноклеточная лимфома), хронических заболеваниях, некоторых вырусных инфекциях.

Снижение отмечается при первичных иммунодефицитах, вирусных инфекциях, системных хронических заболеваниях, стрессе, лечении цитостатиками и кортикостероидами.

Рецептор CD95+ – один из рецепторов апоптоза. Апоптоз – сложный биологический процесс, необходимый для удаления из организма поврежденных, старых и инфицированных клеток. Рецептор CD95 экспрессируется на всех клетках иммунной системы. Он играет важную роль в контроле функционирования иммунной системы, так как является одним из рецепторов апоптоза. Его экспрессия на клетках определяет готовность клеток к апоптозу.

Снижение доли CD95+-лимфоцитов в крови пациентов свидетельствует о нарушении эффективности последнего этапа выбраковки дефектных и инфицированных собственных клеток, что может привести к рецидиву заболевания, хронизации патологического процесса, развитию аутоиммунных заболеваний и повышению вероятности опухолевой трансформации (к примеру, рака шейки матки при папилломотозной инфекции). Определение экспрессии CD95 имеет прогностическое значение при миело- и лимфопролифератиных заболеваниях.

Повышение интенсивности апоптоза наблюдается при вирусных заболеваниях, септических состояниях, при употреблении наркотических средств.

Активированные лимфоциты CD3+CDHLA-DR+, CD8+CD38+, CD3+CD25+, CD95. Тест отражает функциональное состояние Т-лимфоцитов и рекомендован для контроля за течением заболевания и контроля иммунотерапии при воспалительных заболеваниях разной этиологии.

Оценка состояния Т-клеточного звена иммунитета: T-лимфоциты (CD3+CD19-), T-хелперы (CD3+CD4+CD45+), T-цитотокс. (CD3+CD8+CD45+), T-reg. (CD4+CD25brightCD45+), активированные (CD3+HLA-DR+CD38+)

Исследование включает в себя определение абсолютных и относительных значений субпопуляционного состава Т-лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD45), количества Т-регуляторных лимфоцитов ( T-reg. Cells) соотношения Т – хелперы/Т – цитотоксические клетки и Т-клеток, несущих на своей поверхности маркеры активации CD38, HLA-DR. Рекомендуется к назначению для контроля показателей клеточного звена иммунной системы в динамике после комплексного иммунологического обследования.

Иммунофенотипирование, клеточный иммунитет, многоцветный клеточный анализ методом проточной цитометрии, Т-клетки, Т-хелперы, Т-цитотоксические клетки, Т-регуляторных лимфоциты.

Human Immune System, Immunophenotyping, Multicolor Flow Cytometry Cell Analysis, Human Leukocyte Differentiation Antigens, Human T cells, T helper cells, Cytotoxic T cells, T-reg Cells, Activation markers.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Общая информация об исследовании

Оценка клеточного состава (иммунофенотипирование) лимфоцитов крови человека – основной компонент в оценке иммунного статуса – выполняется методом проточной цитофлуориметрии.

Иммунофенотипирование – характеристика клеток при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.

Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD-антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития. CD-антигены (англ. cluster of differentiation antigens) – это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флюоресцентно-меченые моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии произвести подсчёт содержания лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.

В основе проточной цитофлуориметрии лежит проведение фотометрических и флюоресцентных измерений отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.

СD3

Этот маркер позволяет идентифицировать зрелые покоящиеся (интактные) Т-клетки и подсчитать общее количество Т-лимфоцитов. Количественная оценка субпопуляции CD3+ лимфоцитов имеет диагностическую значимость в следующих случаях:

– первичные и вторичные иммунодефициты;

– острые вирусные инфекции, включая ВИЧ;

– внутриклеточные бактериальные и паразитарные инфекционные заболевания (например, туберкулез, лепра, лейшманиоз);

– реакции отторжения трансплантатов и болезни “трансплантат против хозяина”;

– лимфопролиферативные расстройства (острый Т-лимфобластный лейкоз).

При сахарном диабете довольно часто наблюдается снижение у больных процентного содержания и абсолютного числа СD3+ лимфоцитов.

СD4

Использование МКА к CD4 антигену дает возможность количественно охарактеризовать особый клон клеток, получивших название Т-хелперов/индукторов. СD4+ клетки в функциональном отношении делятся на два вида хелперных лимфоцитов: Т-хелперы 1-го порядка (Th1-клетки) и 2-го порядка (Th2-клетки). Различные CD4+ Т-клетки продуцируют разные наборы цитокинов. Th1-клетки (их называют еще клетками гиперчувствительности замедленного типа – ГЗТ) – цитокины для клеточного иммунного ответа: интерлейкин 2 (IL-2), IL-3, g-IFN, TNF-a, TNF-b, – среди которых дискриминантным цитокином является g-IFN. Th2 секретируют набор цитокинов, необходимый для гуморального иммунного ответа: IL-3, 4, 5, 6, 10, 13, TNF-b, – среди которых дискриминантным цитокином является IL-4.

Определение количества CD4+ клеток имеет значение в диагностике состояний, связанных с дефектами антителопродукции и реакций клеточноопосредованного иммунитета. Показателю числа CD4+ клеток отводится решающая роль для прогноза течения ВИЧ-инфекции.

Функциональное состояние CD4+ лимфоцитов тестируют по цитокиновому профилю: функциональная полноценность Th1-клеток подтверждается по секреции g-IFN, а Th2-клеток – по секреции IL-4.

СD8

Дифференцировочная молекула CD8 представляет собой гликопротеин, обнаруживаемый на поверхности тимоцитов и Т-лимфоцитов и участвующий в распознавании антигенных пептидов в контексте с молекулами главного комплекса гистосовместимости (MHC) класса I.

Клиническая значимость определения количества СD8+ лимфоцитов:

• вирусные инфекции (при определенной модификации имеется возможность количественной оценки вирусоспецифических цитолитических CD8+ Т-лимфоцитов);
• при ряде заболеваний большое прогностическое значение имеет соотношение между CD4- и CD8-субпопуляциями Т-лимфоцитов (иммунорегуляторный индекс CD4/CD8); например, прогрессирующее снижение иммунорегуляторного индекса у ВИЧ-инфицированных больных может свидетельствовать о переходе в СПИД;
• злокачественные новообразования;
• оценка эффективности проведенной вакцинации (в особенности противовирусными вакцинами).

До недавнего времени приписываемая субпопуляции CD8+ клеток супрессорная активность сейчас практически полностью отвергается. По данным большинства экспериментальных и клинических исследований считается, что существование какой-либо отдельной популяции Т-супрессорных клеток, даже без привязки к CD8-маркеру, маловероятно.

При аутоиммунных тиреоидитах, в частности при диффузном токсическом зобе (ДТЗ), в реакциях клеточного иммунитета отмечается снижение субпопуляции CD8+ лимфоцитов и снижение функциональной активности цитотоксических лимфоцитов.

При сахарном диабете также отмечается уменьшение функциональной активности и количества CD8+ лимфоцитов.

Снижение фракции СD8+ лимфоцитов наблюдается также у больных с первичной хронической недостаточностью коры надпочечников (болезнь Аддисона).

Анти-HLA–DR

Молекула HLA-DR также является маркером активации и принадлежит к МНС II класса. Она представляет собой трансмембранный гликопротеин, состоящий из a- и b-субъединиц, имеющих молекулярный вес 36 и 27 кД. Анти-HLA-DR реагирует только с эпитопом HLA-DR и не имеет перекрестных реакций с молекулами HLA-DQ и HLA-DP. Он экспрессируется на В-лимфоцитах, моноцитах, макрофагах, активированных Т-лимфоцитах.

Имеются данные о том, что молекула HLA-DR экспрессируется примерно на 10 % Т-лимфоцитах ПК, однако при активации клеток митогеном количество и плотность ее экспрессии резко возрастает. Существует предположение, что молекула HLA-DR на Т-клетках может выступать в качестве рецептора, участвующего в трансдукции сигнала активированными Т-лимфоцитами. Это наводит на мысль о ее возможной роли в качестве “профессиональной” АПК, участвующей в поддержании иммунной памяти.

HLA-DR также может присутствовать на клетках эпителия тимуса, на клетках В-лимфоцит-зависимых полей селезенки и лимфатических узлов, В-клеточной лимфомы. Этот антиген имеет коэкспрессию с CD1а антигеном на клетках Лангерганса.

CD25

Антиген CD25 известен как низкоаффинный рецептор ИЛ2, имеющий молекулярную массу 55 кД.

Молекула CD25, ассоциированная с b-цепью (CD122) и общей g-цепью (CD132), формирует высокоаффинный комплекс рецептора ИЛ-2. В процессе воспаления может вырабатываться растворимая форма ИЛ-2R. Маркер CD25 присутствует на субпопуляцях Т- и В-лимфоцитов периферической крови, в том числе на активированных макрофагах, НK. Его экспрессия резко возрастает при активации ФГА и КонА на поверхности CD3-активированных Т-лимфоцитов, на Т-клетках из смешанной культуры лимфоцитов, на инфицированных HTLV Т-лимфоцитах лейкемической линии при Т-лимфоцитарной лейкемии.

Метод позволяет определить количественное соотношение основных популяций Т-лимфоцитов:

• Т-лимфоциты (CD3 + CD19 – );
• Т-хелперы/индукторы ( CD3 + CD4 + CD45 + );
• Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) ( CD3 + CD8 + CD45 + );
• соотношение Т-хелперы / Т-цитотоксические лимфоциты (CD3 + CD4 + / CD3 + CD8 + ).

малые клеточные популяции, а также изучить их функциональную активность:

• активированные Т-лимфоциты (CD3 +HLA–DR + CD45 + );
• регуляторные Т-хелперные клетки (CD4 +CD25brigCD45 + ), выполняющие иммуносупрессорную функцию
• активированные цитотоксические Т-лимфоциты (CD3 +CD8brightCD38 + ) (% от всех Т-лимфоцитов)
• активированные Т-лимфоциты, экспрессирующие a-цепь рецептора ИЛ-2 (CD3 +CD25 +CD45 + ).

Когда назначается исследование?

Являясь реальными супрессорами, Т-регуляторные клетки играют ведущую роль во многих иммунологических процессах: регулируют Т-клеточный гомеостаз, предотвращают аутоиммунные заболевания, аллергии, гиперчувствительность, реакцию “трансплантат против хозяина”. Вместе с тем регуляторные Т-клетки снижают противоопухолевый иммунитет и иммунитет к инфекциям.

Особый интерес представляют исследования, связанные с изучением соотношения аутоактивных клонов В-клеток и регуляторных Т-клеток при различной патологии воспалительного генеза. Так, при осложненном течении ряда патологических воспалительных процессов сохранение высокого уровня Т-reg и В1- клеток к 30-м суткам характеризует сохранение напряженности воспалительного процесса и, возможно, начало формирования дефекта функционирования Т-reg клеток, которое впоследствии может привести к хронизации воспаления и к развитию аутоиммунного процесса.

Таким образом, наличие и количественные характеристики этой популяции служат важным диагностическим признаком.

Рекомендовано для комплексного обследования пациентов, входящих в группу риска по четырем основным иммунопатологическим синдромам.

С инфекционным синдромом:

• частые ОРВИ, хронические инфекции ЛОР-органов (гнойные синуситы, отиты, периодически встречающиеся лимфадениты, пневмонии с тенденцией к рецидивированию, бронхоплевропневмонии);
• бактериальные инфекции кожи и подкожной клетчатки (пиодермии, фурункулез, абсцессы, флегмоны, септические гранулемы, рецидивирующий парапроктит у взрослых);
• урогенитальные инфекции;
• грибковые поражения кожи и слизистых оболочек, кандидоз, паразитарные инвазии;
• рецидивирующий герпес различной локализации;
• гастроэнтеропатия с хронической диареей неясной этиологии, дисбактериозом;
• длительный субфебрилитет, лихорадка неясной этиологии;
• генерализованные инфекции (сепсис, гнойные менингиты).

С аллергическим (атопическим) синдромом:

• атопический дерматит;
• нейродермит;
• экзема с инфекционным компонентом;
• тяжелая атопическая бронхиальная астма, поллиноз, хронический астматический бронхит.

С аутоиммунным синдромом:

• ревматоидный артрит;
• рассеянный склероз;
• диффузные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, дерматомиозит);
• аутоиммунный тиреоидит;
• неспецифический язвенный колит;

С иммунопролиферативным синдромом:

• опухолевые процессы в иммунной системе (лимфомы, болезнь Ходжкина, острый и хронический лимфолейкоз, саркома Капоши).

Что означают результаты?

Изменения различных клеточных популяций лимфоцитов в сторону повышения или понижения развиваются при различных патологических процессах в организме, таких как инфекции, аутоиммунные и онкологические заболевания, иммунодефициты, в постоперационном периоде, при трансплантации органов.

Ниже представлена таблица с клиническими ситуациями, которые могут приводить к изменениям в субпопуляционном составе лимфоцитов.

Субпопуляция лимфоцитов

Повышение показателя

Снижение показателя

T-лимфоциты (CD3 + CD19 – )

• Острые и хронические инфекции;

• длительный прием лекарственных препаратов (особенно монотерапия);

• прием биологически активных добавок;

• интенсивные занятия спортом;

• Некоторые виды инфекций;

• алкогольный цирроз печени;

• прием иммуносупрессивных препаратов.

Т-хелперы (CD3 + CD4 + CD45 + )

• Ряд аутоиммунных заболеваний;

• отдельные Т-клеточные лейкозы;

• отравление солями бериллия.

• Иммунодефицитные состояния (основной лабораторный признак вторичного иммунодефицита);

• алкогольная болезнь печени;

• прием иммуносупрессивных препаратов или стероидов.

Т-цитотоксические лимфоциты (CD3 + CD8 + CD45 + )

• Некоторые вирусные инфекции;

• ряд Т-клеточных лейкозов;

• острая фаза аллергии;

• ряд аутоиммунных патологий.

• Некоторые виды аутоиммунных, аллергических заболеваний;

T-reg. (регуляторные Т-клетки (CD4+CD25brightCD45+)

(сахарный диабет 1-го типа, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, аутоиммунный тиреоидит, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, миастения);

• аллергические заболевания (бронхиальная астма, атопический дерматит, пищевая аллергия).

Активированные Т-лимфоциты (CD3+HLA-DR+CD45+)

• алкогольный цирроз печени;

Не имеют диагностического значения.

В совокупности с клиническими данными, симптоматикой, другими методами лабораторных исследований вышеуказанные изменения являются диагностическим признаком возникновения этих патологических процессов в организме человека.

• Результаты данного исследования необходимо сопоставлять с клиническими данными и показателями других лабораторных анализов.
• Оценка показателей в динамике существенно повышает клиническую значимость исследования.

Клеточный иммунитет (Т-лимфоциты, Т-хелперы, Т-цитотоксические клетки, Иммунорегуляторный индекс, B-лимфоциты, NK-T-клетки, NK-клетки, Лейкоцитарная формула) (венозная кровь) в Москве

Лабораторное исследование для оценки клеточного иммунитета. Клеточный иммунитет защищает организм от вирусов, а также индуцирует процесс отторжения чужеродных органов и тканей. Исследование проводится с целью уточнения степени поражения иммунной системы, а также для подбора адекватной терапии и оценки ее эффективности.

• Об исследовании Обзор
• Как подготовиться? Подготовка
• Расшифровка Результат

• Приём, исследование биоматериала
• Показания к назначению
• Описание

Приём и исследование биоматериала

• Можно сдать в отделении Гемотест
• Можно сдать анализ дома

Когда нужно сдавать анализ Клеточный иммунитет (Т-лимфоциты, Т-хелперы, Т-цитотоксические клетки, Иммунорегуляторный индекс, B-лимфоциты, NK-T-клетки, NK-клетки, Лейкоцитарная формула)?

1. Частые вирусные заболевания (ОРВИ, синуситы, отиты);
2. Бактериальные и грибковые поражения кожи;
3. Урогенитальные инфекции;
4. Кожные аллергические реакции (атопический дерматит, экзема, псориаз);
5. Аутоиммунные заболевания (ревматоидный артрит, системная красная волчанка и др);
6. Онкологические заболевания.

Подробное описание исследования

В норме организм человека обладает врожденной резистентностью (устойчивостью) к воздействию физических, химических и биологических факторов. Устойчивость складывается из многих частей и в комплексе образует иммунную систему организма.

Иммунная система определяет «свои» и чужеродные клетки и, в зависимости от поступающей угрозы, активирует гуморальный или клеточный иммунитет.

Гуморальный иммунитет осуществляется В-лимфоцитами и CD4+ Т-хелперами II типа. Гуморальный иммунитет отвечает за защиту от внеклеточных патогенов (бактерий, вирусов, простейших, грибов, гельминтов).

Клеточный иммунитет представлен макрофагами, клетками-киллерами (NK-клетки), антиген-специфичными цитотоксическими Т-лимфоцитами. Клеточный иммунитет защищает организм от внутриклеточных патогенов (клеток, инфицированных вирусами, внутриклеточных бактерий, а также опухолевых клеток).

Обнаружилось, что при развитии аллергических, аутоиммунных, онкологических, инфекционных и многих других заболеваний возникают различные изменения со стороны иммунной системы: снижается фагоцитоз (процесс уничтожения чужеродных клеток), отмечается дисбаланс иммуноглобулинов, снижается концентрация Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов, а также их субпопуляций.

Чтобы идентифицировать патологический процесс, определяют количественную и функциональную характеристику субпопуляций клеток, ответственных за формирование иммунитета.

Идентификация иммунокомпетентных клеток и определение их функциональной способности включает:

1. Выделение лейкоцитарной фракции крови;
2. Обработку выделенных клеток с помощью моноклональных (иногда поликлональных) меченых флюорохромом антител к антигенам исследуемых популяций лимфоцитов;
3. Идентификацию маркер-несущей субпопуляции при помощи метода проточной цитометрии или иммунофлюоресценции.

Проточная цитометрия позволяет измерить ключевые параметры клетки и ее органелл, а также охарактеризовать происходящие в ней процессы.

Дается характеристика следующим параметрам: Т-лимфоцитам, Т-хелперам, Т-цитотоксическим клеткам, иммунорегуляторному индексу (отражает соотношение Т-хелперов и Т-киллеров в сыворотке крови), В-лимфоцитам, NK-T-клеткам, NK-клеткам (NK- и NKT-клетки – это естественные клетки-киллеры. Они разрушают клетки, зараженные вирусной инфекцией и опухолевые клетки. Подключаются только в том случае, когда Т-лимфоциты не справляются с угрозой).

Также определяется лейкоцитарная формула, она отражает процентное соотношение пяти типов лейкоцитов — нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, эозинофилы, базофилы — и определяет их количество в единице объема.

Лимфоциты в крови

• Лимфоциты – что это, какие они бывают
• Показания для проведения анализа
• Подготовка к анализу
• Метод исследования
• Нормы
• Лимфоциты повышены
• Лимфоциты понижены
• Лимфоцитоз у детей

Лимфоциты – что это, какие они бывают

Лимфоциты – это один из компонентов белых кровяных телец, для их обнаружения используют общий анализ крови на лимфоциты. Они играют важную роль в формировании иммунных реакций. Их функция состоит в распознавании возбудителей болезней и мутировавших собственных клеток. После идентификации чужеродного объекта лимфоциты уничтожают его тем или иным путем: фагоцитоз, выработка специальных антигенов. Для уничтожения собственных клеток, переродившихся в раковые либо подвергшиеся другим изменениям лимфоциты подают особый химический сигнал, который заставляет такую клетку запустить процесс самоуничтожения. Помимо общего анализа крови на лимфоциты, в медицинском центре МедАрт проводят биохимический анализ крови.

Существует три разновидности этих клеток:

1. Т-лимфоциты. Они созревают в тимусе. Играют важную роль в борьбе с инородными телами, инфекциями. Часть Т-лимфоцитов выполняет регуляторные функции, отвечает за длительность и силу иммунной реакции. Именно эти клетки поражаются при заражении ВИЧ.
2. В-лимфоциты. Их основная задача – выработка антител против вирусов, других возбудителей инфекции. Кроме того, они способны сохранять информацию о перенесенных заболеваниях создавая тем самым постоянный иммунитет.
3. NK – клетки. Их главная функция – обнаружение и устранение клеток организма переродившихся в злокачественные.

Образуются лимфоциты в красном костном мозге, их молодые, незрелые формы называются лимфобластами. Созревание идет в несколько стадий, происходит не только в костном мозге, но и в лимфоидных узлах, других органах лимфатической системы.

Появление повышенного количества лимфоцитов может служить маркером патологий костного мозга, развития опухолевых процессов в нем. Увеличение уровня лимфобластов также фиксируется при длительных инфекционных процессах. В этом случае это служит признаком истощения защитных сил организма. Иммунная система не успевает подготовить достаточное количество лимфоцитов к борьбе с возбудителем, это и становится причиной появления в крови большого количества лимфобластов.

Показания для проведения анализа

Общий анализ крови на лимфоциты назначают если есть подозрение на повышение либо уменьшение их количества. Анализ может назначаться по другим причинам, он позволяет получить много ценных данных о состоянии крови и всего организма. К основным показаниям относятся:

• Выявление реакции иммунитета на присутствие патогенных микроорганизмов.
• Состояние иммунитета человека.
• Физический и химический состав крови.
• Профилактический анализ – для обнаружения скрытых изменений в формуле крови, которые не проявляют себя конкретными симптомами.

Подготовка к анализу

Анализ на лимфоциты входит в общий анализ крови, правила их проведения совпадают. То есть особой подготовки такое обследование не требует. Есть всего два условия которые нужно соблюдать:

• Кровь берется в утренние часы.
• За 8-12 часов до забора крови нужно воздержаться от пищи.

Также не следует курить за 2-3 часа до проведения процедуры. Компоненты табачного дыма могут вызывать серьезные временные изменения в уровне белых кровяных клеток. Стоит избегать употребления алкоголя за 2-3 дня до взятия анализа так как алкоголь также может повлиять на достоверность полученных результатов.

Если не соблюсти эти требования, возможно ухудшение точности исследования, что приведет к получению врачом недостоверной информации и возможным ошибкам в диагностике либо повторному назначению обследования.

Метод исследования

Забор материала для анализа на лимфоциты осуществляется из вены при помощи обычного шприца либо специальной вакуумной системы. Традиционная техника взятия анализа при помощи обычного шприца на данный момент устарела и может приводить к следующим сложностям:

• Свертывание крови в игле.
• Разрушение части клеток крови.
• Длительное время проведения манипуляции.
• Контакт крови с окружающей средой
• Сложность с соблюдением правильного соотношения крови и реагентов.Кроме того, традиционная техника не исключает контакта медперсонала с биоматериалом пациента, что может представлять опасность для здоровья. Поэтому во многих клиниках для забора крови применяют современные вакуумные контейнеры.

Кровь в него поступает за счет вакуума в пробирке, все параметры вакутейнера подбираются на этапе производства с целью сократить время для забора крови и обеспечить правильное соотношение количества реагента и крови.

Преимущества вакуумных систем:

• Стандартизированный процесс забора крови, занимающий минимальное время.
• Полностью исключен контакт медперсонала с кровью пациента.
• Простая маркировка и идентификация проб, что исключает путаницу с пробирками.
• Почти безболезненное проведение процедуры.

Взять кровь для общего анализа можно из пальца, но в настоящий момент эта процедура используется значительно реже.

Нормы

Нормальный уровень лимфоцитов в крови зависит от возраста пациента. У детей количество лимфоцитов выше, со временем этот показатель постепенно снижается. На количество этих клеток влияет пол пациента, у женщин показатель относительно выше. Это связано с большей активностью и адаптивной способностью лимфатической системы женского организма.

Лимфоциты повышены

Причиной того, что лимфоциты повышены часто выступают разнообразные вирусные инфекции. Такое повышение называется лимфоцитозом, чаще всего его регистрируют при заболеваниях, вызванных вирусами:

• Эпштейн-Барр.
• Аденовирус.
• Герпес.
• Детские инфекции (краснуха, корь, паротит).

Количество лимфоцитов может расти при некоторых бактериальных инфекциях, например, сифилисе, коклюше или туберкулезе. К лимфоцитозу могут приводить заболевания, вызванные простейшими, например, малярия и токсоплазмоз. Нередко повышение лимфоцитов вызвано глистными инвазиями.

Лимфоциты могут быть повышаться по причинам, не связанным с инфекциями. К ним относятся:

1. Реакции гиперчувствительности.
2. Стрессовый лимфоцитоз.
3. Аутоиммунные заболевания.
4. Нарушения эндокринных органов, особенно щитовидной железы.
5. Развитии опухолей и предопухолевых процессов.

К наиболее ярким признакам повышения числа лимфоцитов относятся:

• Увеличенные печени, селезенки и лимфатических узлов.
• Общее недомогание, проявления инфекций органов дыхания, покраснения и отек слизистых оболочек.
• Резкое повышение либо снижение температуры, сопровождающееся ознобом.
• Диспепсические явления – рвота, нарушения стула, тошнота.
• Расстройства нервной системы на фоне повышенной температуры.

Нужно учитывать, что лимфоцитоз не всегда проявляется через выраженные симптомы. Зачастую повышения уровня этих клеток обнаруживается случайно. Точно определить причину по которой произошло изменение формулы крови сможет только врач, для этого часто требуется проведение дополнительных тестов.

Чтобы устранить лимфоцитоз, нужно вылечить заболевание, которое привело к повышенной реакции иммунитета. Важно понимать, что кроветворная система отвечает на выздоровление с определенной задержкой. Даже после полного излечения лимфоцитоз может сохраняться до нескольких месяцев.

Лимфоциты понижены

Понижение лимфоцитов называется лимфопенией. Такое состояние характерно для следующих заболеваний:

• СПИД.
• Длительные, тяжело протекающие инфекции.
• Патологии костного мозга.
• Опухоли лимфатических тканей.
• Облучение радиацией.
• Прием некоторых групп препаратов, таких как цитостатики.
• Беременность.

В большинстве случаев снижение уровня лимфоцитов свидетельствует об истощении иммунной системы, когда организм по различным причинам не в состоянии поддерживать нужный уровень этих клеток в крови.

Лимфопения редко проявляется характерными симптомами. К наиболее частым признакам этого состояния относятся:

• Уменьшение либо полное отсутствие миндали и других периферических лимфоузлов.
• Заболевания кожи – экзема, пиодермия.
• Общие признаки болезней крови – язвы слизистой оболочки рта, петехии, бледность, желтуха.
• Увеличение печени и селезенки.

Как и в случае с лимфоцитозом, для нормализации уровня этих клеток нужно устранить причину, которая привела к патологическому состоянию. Нужно обратиться к врачу, который сможет установить точный диагноз и назначить правильную схему лечения.

В случае лимфопении беременных, при умеренном снижении уровня лимфоцитов особых мер принимать нет необходимости. Достаточно усиленного контроля за состоянием здоровья и регулярного прохождения всех нужных обследований. Если произошло резкое падение лимфоцитов – стоит обратиться за медицинской помощью для дополнительной диагностики.

Лимфоцитоз у детей

Особенностью детского возраста являются достаточно значительные изменения в формуле крови. Выделяют два так называемых перекреста, когда происходят резкие изменения соотношения клеток крови. Первый происходит в возрасте около недели после рождения, когда количество лимфоцитов начинает превышать количество остальных клеток крови. Второй перекрест происходит в 5-6 лет, когда количество лейкоцитов начинает преобладать над лимфоцитами.

Эти явления носят физиологический характер и являются проявлениями нормального развития иммунной, кроветворной систем. Но встречаются и патологические лимфоцитозы, которые свидетельствуют о развитии разнообразных болезней (в основном инфекционной природы).

Основной причиной повышения лимфоцитов в детском организме выше нормы являются инфекционные болезни, вызываемые различными вирусами. Чаще всего это заболевания, характерные для детского возраста – корь, краснуха, простудные инфекции. Может расти уровень лимфоцитов и по другим причинам:

• Аллергические реакции.
• Авитаминоз, систематическое недоедание.
• Бронхиальная астма.
• Отравления химическими веществами.

Несмотря на то, что повышение лимфоцитов в детском организме далеко не всегда сопровождается характерными симптомами, существует ряд признаков свидетельствующих об этом. К ним относятся:

• Повышение температуры тела.
• Сыпь.
• Увеличение миндалин и других региональных лимфоузлов.
• Нарушения пищеварения.
• Симптомы общего недомогания – слабость, быстрая утомляемость.

При проявлении таких симптомов нужно обратиться к педиатру и пройти рекомендуемые обследования. После постановки диагноза врач назначит соответствующее лечение, которое устранит причину активизации иммунной системы.

Нужно учитывать, что нормальный уровень лимфоцитов восстанавливается с запозданием. Даже после полного восстановления после инфекции либо других заболеваний пройдет от нескольких недель до 1-2 месяцев до нормализации уровня белых кровяных клеток. Это физиологический процесс, который не требует дополнительного лечения и не должен вызывать беспокойства.

Иммунная система Часть 8 Анализы

Иммунная система Часть 8 Анализы

Помимо поражения вирусом иммунодефицита человека, вторичный иммунодефицит развивается после объемных оперативных вмешательств, обширных, тяжелых инфекций, на фоне терапии иммуноподавляющими или сильными противовоспалительными препаратами.

Исследования иммунитета помогают в оценке активности и стадии воспалительного, инфекционного и аллергического иммунного ответов, эффективности проводимой терапии. С этой целью они проводятся неоднократно.

Клинический анализ крови с лейкоцитарной формулой

Клинический анализ крови с лейкоцитарной формулой позволяет выявить множество заболеваний. Он отражает состояние гемопоэза – созревания и роста клеток крови в костном мозге. О состоянии иммунной системы говорят уровни белых клеток крови – лейкоцитов и лейкоцитарная формула. Наблюдение за лейкоцитарной формулой в динамике заболевания позволит выявить осложнения, распространение инфекции по организму, реакцию на лечение.

При бактериальных инфекциях можно увидеть повышение лейкоцитов и нейтрофилов с появлением их молодых форм в крови.

При вирусных инфекциях, наоборот, лейкоциты снижаются, а в лейкоцитарной формуле преобладают лимфоциты.

Преобладание тех или иных популяций в лейкоцитарной формуле помогает в диагностике причины воспаления. Например, при определенных инфекциях (например, инфекционный мононуклеоз) нарастают измененные моноциты, а при аллергических и паразитарных заболеваниях – эозинофилы.

Наличие совсем юных клеток (бластов) в крови признак чрезмерной активации костного мозга, а низкий уровень лейкоцитов и нейтрофилов без воспаления – его угнетения.

Лимфоциты, иммунофенотипирование

Выделяют разные популяции лимфоцитов, которые играют ключевую роль в направлении иммунного ответа – клеточный или гуморальный. Определение иммунного фенотипа лимфоцита возможно в специальном исследовании методом проточной цитофлюориметрии. Фенотип лимфоцитов зависит от особых рецепторов на их поверхности – кластеров дифференцировки CD. Наличие того или иного рецептора свидетельствует о принадлежности клетки к определенной популяции лимфоцитов.

Т-лимфоциты (CD3+) общие и их подтипы:

Т- клетки-киллеры (CD3+CD16+CD56+)

Естественные клетки-киллеры (CD3-CD16+CD56+)

Лимфоциты с маркером HLA-DR+

Иммунорегуляторный индекс (Т-хелперы/Т-цитотоксические)

Дополнительно исследуют другие CD маркеры лимфоцитов для определения их активности.

Оценка результата возможна только в совокупности с данными клинической картины и иммуномодулирующей терапии. Иммунофенотипирование лимфоцитов, как правило, проводят в динамике. Так, при ВИЧ-инфекции, поражающей Т-хелперы, снижение уровня CD3+CD4+ – клеток и иммунорегуляторного индекса (CD3+CD4+/CD3+CD8+) имеет плохой прогностический прогноз по течению заболевания.

Циркулирующие иммунные комплексы и система комплемента

Антигены связываются специфическими антителами с образованием иммунных комплексов. Последние активируют комплемент, способствуют удалению чужеродных антигенов. Если их слишком много циркулирует в крови, они откладываются в тканях, например почек, кожи, легких. Высокое содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) наблюдается при аутоиммунных, хронических воспалительных и инфекционных заболеваниях. С другой стороны, определение ЦИК в крови неспецифично, не отражает ни причину их нарастания, ни непосредственное влияние на органы.

Снижение уровней ЦИК на фоне лечения говорит о затихании воспалительного процесса и эффективности терапии.

Наиболее распространенными анализами на систему комплемента являются определение ключевых С3 и С4 компонентов. Показаниями для исследования – повторяющие инфекции, ревматические и аутоиммунные заболевания для выявления врожденных дефицитов комплемента, утяжеляющих течение этих болезней.

Исследуют уровни ЦИК, С3-компонент и С4-компонент комплемента.

Иммуноглобулины A, M, G, E

Общие иммуноглобулины – показатели гуморального иммунного ответа. Уровни IgM возрастают в острый период заболевания и при обострении хронической инфекции, IgG – в процессе выздоровления, IgA – в острый период заболевания, сохраняясь дольше IgM, отражают затяжное течение и поражение слизистых оболочек. Повышенные уровни IgE свидетельствуют об аллергическом воспалении.

Общие иммуноглобулины не объясняют причину инфекции, поэтому целесообразно смотреть специфические антитела к конкретным возбудителям. Основные показания для определения общих антител – это подозрение на врожденный иммунодефицит, связанный с гуморальным иммунитетом.

Интерфероновый статус и Интерлейкины

Исследования Интерфероновый статус, Интерлейкин-1бета, Интерлейкин-6, Интерлейкин-8, Интерлейкин-10, Фактор некроза опухоли-альфа и другие определяют уровни цитокинов – специфических маркеров иммунного ответа. Помогают в определении стадии заболевания, врожденных дефектов, онкологических заболеваний, активности воспалительного процесса и осложнений. Как правило, требуют динамического контроля для помощи в оценке клинической ситуации и эффективности лечения.

Фагоцитарная активность

Фагоцитарной активностью обладают нейтрофилы, моноциты-макрофаги и другие клетки. Фагоцитоз – это способность поглощать и переваривать антигены, вплоть до целых клеток. Он определяет возможности врожденного иммунитета и необходим для формирования приобретенного иммунитета. Оценка фагоцитарной активности клеток крови трудоемка и сложна. Используют такие тесты как оценка фагоцитоза бактерий с флюоресцентной меткой, тест по восстановлению нитросинего тетразолия.

Фагоцитарная активность повышается при бактериальных, аутоиммунных, аллергических заболеваниях.

Ее снижение наблюдается при врожденных дефектах фагоцитарной системы, хронических инфекциях.

Иммунограмма – это общее название всех исследований иммунного статуса. И в разных лабораториях включают разное сочетание анализов в зависимости от цели обследования. Для оценки клеточного иммунитета применяют исследование иммунофенотипов лимфоцитов. Для оценки гуморального иммунитета – общие иммуноглобулины, при необходимости дополняя их ЦИК, комплементом и белками острой фазы. Для оценки врожденного иммунитета больше подходят определения цитокинов в крови, фагоцитарная активность.

Аутоиммунный тиреоидит: современные представления об этиологии, патогенезе, диагностике и лечении (лекция)

Полный текст:

• Статья
• Об авторах
• Cited By

Аннотация

Значительное место в практической деятельности врачей- эндокринологов занимают диагностика и лечение заболеваний щитовидной железы. Среди них одним из наиболее частых является аутоиммунный тиреоидит (АИТ). Распространенность АИТ среди населения разных стран колеблется от 0,1— 1,2% у детей до 6—11% у женщин старше 60 лет (Matsuura и соавт., 1990). По данным A. Weetman (1992), частота АИТ в популяции (клинически явные формы) составляет 1%. В то же время субклинический тиреоидит и циркулирующие антитиреоидные антитела могут быть обнаружены у 10—15% практически здоровых лиц, находящихся в эутиреоидном состоянии. Соотношение болеющих мужчин и женщин составляет 1:4— 1:8 (Р. Langer, 1996).

Ключевые слова

Для цитирования:

Петунина Н.А., Герасимов Г.А. Аутоиммунный тиреоидит: современные представления об этиологии, патогенезе, диагностике и лечении (лекция). Проблемы Эндокринологии. 1997;43(4):30-33. https://doi.org/10.14341/probl199743430-33

For citation:

Petunina N.A., Gerasimov G.A. Autoimmune thyroiditis: current understanding of the etiology, pathogenesis, diagnosis and treatment (lecture). Problems of Endocrinology. 1997;43(4):30-33. (In Russ.) https://doi.org/10.14341/probl199743430-33

Значительное место в практической деятельности врачей- эндокринологов занимают диагностика и лечение заболеваний щитовидной железы. Среди них одним из наиболее частых является аутоиммунный тиреоидит (АИТ). Распространенность АИТ среди населения разных стран колеблется от 0,1— 1,2% у детей до 6—11% у женщин старше 60 лет (Matsuura и соавт., 1990). По данным A. Weetman (1992), частота АИТ в популяции (клинически явные формы) составляет 1%. В то же время субклинический тиреоидит и циркулирующие антитиреоидные антитела могут быть обнаружены у 10—15% практически здоровых лиц, находящихся в эутиреоидном состоянии. Соотношение болеющих мужчин и женщин составляет 1:4— 1:8 (Р. Langer, 1996).

Классификация. АИТ является одним из наиболее типичных аутоиммунных заболеваний. Впервые он был описан Ха- шимото в 1912 г. Большинство авторов выделяют 2 основные формы АИТ (гипертрофическую — зоб Хашимото и атрофическую — первичную микседему), являющиеся причиной развития спонтанного гипотиреоза. Отдельной формой тиреоидита, также предположительно имеющей аутоиммунную основу, является послеродовой тиреоидит (ПТ). Ниже представлена классификация хронических тиреоидитов.

гипертрофическая форма (зоб Хашимото);

атрофическая форма. Фиброзно-инвазивный тиреоидит (Риделя).

Послеродовой (“молчащий”) тиреоидит

Этиология и патогенез. Как и многие аутоиммунные нарушения, АИТ — это взаимодействие генетической предрасположенности и действия факторов окружающей среды, которые в дальнейшем модифицируются под влиянием таких эндогенных факторов, как возраст и уровень секреции половых гормонов (A. Weetman, 1992). Повышенная частота возникновения АИТ у женщин указывает на возможную связь между генами Х-хромосомы и развитием аутоиммунного процесса. Один из вероятных механизмов реализации наследственной предрасположенности может быть связан с влиянием эстрогенов на функцию Т-лимфоцитов. АИТ чаще возникает в возрасте 25—35 лет, однако случаи заболевания могут встречаться в любом возрасте. Наибольшее количество случаев АИТ у женщин отмечается после 60 лет.

АИТ имеет тенденцию проявляться в виде семейных форм болезни. Наблюдение за разнояйцевыми близнецами свидетельствует об одновременном возникновении у них АИТ в 3—9% случаев, а у однояйцевых близнецов — в 30—60% случаев (R. Volpe, 1985).Последний факт является убедительным доказательством наличия инетического фона для развития АИТ. Кроме того, наблюдается сочетание АИТ в пределах одной семьи с другими аутоиммунными заболеваниями — пернициозной анемией, аутоиммунным первичным гипокортицизмом, хроническим активным гепатитом, инсулинзависимым диабетом, аллергическим альвеолитом, витилиго, гнездной плешивостью. синдромом Шегрена, ревматоидным артритом и др. (Herrman и соавт., 1990; В. Ghovolensson и соавт., 1994; Р. Langer, 1996). Описаны случаи, когда один из монозиготных близнецов имел диффузный токсический зоб (ДТЗ), другой — тиреоидит Хашимото. В семьях пациентов с ДТЗ всречается много родственников с тиреоидитом Хашимото (R. Volpe, 1988).

Генетическая обусловленность возникновения АИТ подтверждается ассоциацией его с антигенами системы HLA. Главный комплекс гистосовместимости, называемый у человека HLA, контролирует иммунную реактивность на различные внешние и собственные антигены. При многих аутоиммунных заболеваниях отмечена связь с определенными аллелями HLA, обычно I (HLA А, В, С) и II (HLA D) классов. Подобные ассоциации более сильны с антигенами II класса главного комплекса гистосовместимости. По данным многих исследователей, гипертрофическая форма АИТ сочетается с HLA DR5, тогда как атрофическая форма — с HLA DR3. В небольшом сообщении из Ньюфаундленда показано, что АИТ сочетается с HLA DR4, у пациентов из Торонто и Дании — с HLA DR5, из Венгрии и Англии — с HLA DR3. Имеются также сообщения об ассоциации АИТ с HLA В8 (W. Scherbaum, 1993; A. Weetman, 1992), однако оба автора отмечают слабую взаимосвязь между разитием АИТ и выявлением HLA-гаплотипов. Необходимо отметить, что указанные антигены системы HLA являются маркерами целого ряда аутоиммунных заболеваний, поэтому нельзя рассматривать их в качестве “гена заболеваемости” АИТ, скорее, речь может идти о наличии врожденной предрасположенности к аутоиммунным реакциям.

При типировании остальных аллелей II класса, особенно DQA1, DQB1 и DPB1. выявлен вариант сильнейшего родственного риска развития АИТ — HLA DQW7. Этот признак оказался более надежным, чем HLA DR3 или HLA DR5. Среди японской популяции отмечено наличие локусов DRW6 и DRW12. Wan и соавт. (1995) обнаружили ассоциацию тиреоидита Хашимото с HLA А2 и DRB4*0101. Названные антигены обнаружены у 97% пациентов с АИТ (японцев) по сравнению с 79% в контроле. Напротив, Tamagi и соавт. (1994) сообщили, что среди японцев, больных АИТ, реже по сравнению с контрольной группой обнаруживались антигены HLA DQAl*0102 (9,5% против 24,9%) и DQB 1*0602 (2,9% против 12,6%). Представленные данные могут свидетельствовать о наличии естественных механизмов защиты против аутоиммунных заболеваний.

1. R. Volpe в 1997 г. предложена гипотеза развития аутоиммунных заболеваний щитовидной железы, разработанная на основе клонально-селекционной теории Барнета (1959). Она состоит в следующем: заболевание обусловлено частичным дефектом иммунологического надзора, что связано со специфическим дефицитом Т-лимфоцитов-супрессоров. Этот дефект допускает выживание “запрещенного” клона органоспецифических Т-лимфоцитов, появляющихся в результате случайной мутации. “Запрещенный” клон Т-лимфоцитов взаимодействует с комплементарными органными антигенами, оказывая повреждающее действие на клетки-мишени и запуская тем самым локализованный иммунный процесс по типу гиперчувствительности замедленного типа. Антигенная стимуляция Т-лимфоцитов со стороны клеток-мишеней обусловливвает реакцию бласттрансформации с последующим делением клеток. При этом выделяются медиаторы, которые также оказывают цитотоксическое действие. Т-лимфоциты-хелперы воздействуют соответствующим образом на В-лимфоциты, которые превращаются в плазматические клетки и образуют антитела к тиреоглобулину и микросомальным белковым структурам фолликулярного эпителия. Циркулирующие антитела, кооперируясь на поверхности клеток фолликулярного эпителия с Т-лимфоцитами-киллерами, оказывают цитотоксическое действие на гормонально-активные клетки щитовидной железы, вызывая их деструкцию, постепенное уменьшение их массы и снижение функции щитовидной железы. В ответ на повреждающее действие аутоагрессии наблюдается гиперплазия щитовидной железы, поддерживающая состояние эутиреоза, а иногда сопровождающаяся признаками гиперфункции. Длительный процесс аутоагрессии приводит к постепенному снижению функциональной активности щитовидной железы — прогрессирующему гипотиреозу. По принципу обратной связи нарастает продукция тиреотропного гормона (ТТГ) гипофизом. В конечном итоге это ведет к образованию зоба. Изложенный выше механизм относится к гипертрофической форме тиреоидита Хашимото.

Атрофическую форму АИТ связывают с эффектом блокирующих антител к рецептору ТТГ (Chiovato и соавт., 1990). Циркулирующие в крови аутоантитела к тиреоглобулину и микросомальной фракции не способны оказывать повреждающее действие, пока они нс скооперируются с Т-лимфоцитами- киллерами, которые выделяют цитотоксические факторы, вызывающие разрушение клеток. Этот процесс носит название “антителозависимая клеточноопосредованная цитотоксичность”. Сенсибилизированные к специфическим антигенам Т- лимфоциты высвобождают лимфокины, которые участвуют в эффекте цитотоксичности и могут непосредственно повреждать клетки-мишени. К лимфокинам относятся лимфотоксин, фактор хемотаксиса, МИФ-фактор, фактор некроза опухолей и др. Таким образом, в патогенезе АИТ участвуют клеточный и гуморальный компоненты иммунного ответа.

В 1990 г. опубликовано сообщение о том, что при заболеваниях щитовидной железы в крови больных наряду с известными антителами, такими как антитела к тиреоглобулину, микросомальной фракции, пероксидазе, рецептору ТТГ, обнаруживаются иммуноглобулины, ингибирующие активность пероксидазы щитовидной железы (ТВП — цитотоксические антитела) (Okamoto и соавт., 1991). Bogner и соавт. (1990) также указывают на то, что цитотоксические антитела и антитела к микросомальной фракции не идентичны. Цитотоксические антитела могут обнаруживаться отдельно или в сочетании с классическими антителами. Считают, что наличие ТВП в крови больных может привести к ингибированию активности пероксидазы щитовидной железы и тем самым к развитию гипотиреоза.

Mackenzie и соавт. в конце 80-х — начале 90-х годов изучали клоны внутритиреоидных Т-клеток у больных с аутоиммунными заболеваниями щитовидной железы. При АИТ 59% клонов фенотипически относились к группе супрессоров — цитотоксических клеток, 55% оказывали цитотоксическое действие на аллогенные эритробласты. 55% клонов также реагировали с аутологичными моноядерными клетками периферической крови.

Вместе с тиреоидными антигенами 11% клонов Т-клеток от больных с АИТ реагировали с тиреоглобулином человека, но ни один не взаимодействовал с микросомальным антигеном. 2 клона оказывали цитотоксическое действие на аутологичные, но не аллогенные клетки щитовидной железы. Таким образом, при АИТ большинство Т-клеток щитовидной железы аутореактивно.

Помимо полового и возрастного фактора, существенную роль играют факторы внешней среды, которые могут “запустить” аутоиммунный процесс у генетически предрасположенных лиц. Показано, что распространенность АИТ одинакова в различных географических регионах, однако в тех странах, где отсутствует дефицит йода, относительная частота АИТ может быть выше (Г. Ф. Александрова, 1996).

В литературе продолжает широко дискутироваться вопрос о связи между уровнем потребления йода и частотой АИТ. Так, по мнению J. Rendl и соавт. (1993), прием высоких фармакологических доз йода у генетически предрасположенных животных значительно увеличивает частоту развития АИТ. Однако точные механизмы йодиндуцированной стимуляции тиреоидного аутоиммунитета до сих пор неизвестны. Экспериментальные и клинические исследования показывают, что длительный прием избыточного количества йода может привести к увеличению частоты АИТ и у лиц, имеющих к нему генетическую предрасположенность. Речь идет об очень высоких дозах йода (десятки и сотни миллиграммов), которые содержатся в таких препаратах, как амиодарон (кордарон), рентгеноконтрастных средствах, некоторых антисептиках. Вместе с тем нет оснований считать, что восполнение нормальной потребности в йоде (назначение йода в суточной дозе 100—200 мкг) может увеличивать частоту аутоиммунной патологии щитовидной железы у здоровых лиц (Г. А. Герасимов, Н. А. Петунина, 1993).

Имеются предварительные данные о том, что радиационное воздействие увеличивает как бессимптомное носительство антител к ткани щитовидной железы (микросомальному антигену), так и число пациентов с клинически явными формами болезни (Д. Е. Шилин, Э. П. Касаткина, 1997).

Во многих работах указано на возможную роль бактерий и вирусов как факторов, индуцирующих аутоиммунные заболевания щитовидной железы. Так, J. Tomer и Т. Davies (1993) показали, что классические аутоиммунные заболевания щитовидной железы (болезнь Грейвса—Базедова и АИТ) развиваются при наличии различных патогенных бактерий (Yersinia enterocolitica, ретровирусы).

По мнению Wilson и соавт. (1990), на развитие аутоиммунных заболеваний щитовидной железы оказывает влияние литий. Ими обследована группа из 40 пациентов, которым была назначена медикаментозная терапия по поводу психического заболевания. В ходе терапии использовались препараты, содержащие литий. Авторы обнаружили повышенное образование антител к ткани щитовидной железы на фоне происходивших одновременно типичных изменений в ткани, характерных для аутоиммунного поражения органа.

В ряде работ показано, что лечение интерфероном может вызвать экспрессию молекул HLA-П-гаплотипа на эпителии щитовидной железы in vitro и in vivo, запуская аутоиммунные реакции. Так, у больных раком щитовидной железы, которые получали лечение а-интерфероном, нередко параллельно развивались аутоиммунные заболевания щитовидной железы (W. Scherbaum, 1993). Всем вышеперечисленным факторам отводится провоцирующая роль на фоне генетической предрасположенности к заболеванию.

Морфология. Типичным морфологическим признаком АИТ является локальная или распространенная инфильтрация щитовидной железы лимфоцитами. Такие очаги поражения состоят из лимфоцитов, плазматических клеток и макрофагов. Лимфоциты не только контактируют с фолликулами, но и пенетрируют в цитоплазму ацинарных клеток, что не наблюдается в нормальной щитовидной железе. Характерным является также наличие больших оксифильных клеток (Ашкенази и Гюртля). С помощью электронной микроскопии на основной мембране фолликулов выявляются плотные образования, которые представляют собой отложения иммунных комплексов. Встречаются и фибробласты, особенно при атрофической форме заболевания.

1. Mizurami и соавт. (1992) считают возможным разделять всех больных АИТ по результатам гистологического исследования ткани щитовидной железы на 4 группы: с оксифильным, смешанным, фокальным и гиперпластическим тиреоидитом. При этом авторы выявили связь между результатами гистологического исследования и функциональным состоянием щитовидной железы. Показано, что частота гипотиреоза связана с наличием в тиреоидной ткани оксифильных клеток, а частота гипертиреоза — с наличием гиперплазии эпителия. Больные с фокальным тиреоидитом обычно находятся в состоянии эутиреоза, в то время как у больных хроническим тиреоидитом смешанного типа могут выявляться все формы функционального состояния щитовидной железы (табл. 1).

М. Э Бронштейн (1991) на основе морфологического исследования ткани железы выявила 3 основных гистологических варианта АИТ: 1) классический вариант (собственно зоб Хашимото) в 2 формах — диффузный и диффузно-узловой; 2) хронический лимфоматозный тиреоидит как самостоятельная форма и 3) хронический лимфоматозный струмит. В последнем случае характер и степень выраженности лимфоидной инфильтрации сходны с таковыми при хроническом лимфома- тозном тиреоидите, но сохраняется тиреоидная ткань с выраженными зобными изменениями.

Диагностика аутоиммунного тиреоидита

Диагностика АИТ основывается на следующих основных клинических, лабораторных и инструментальных методах обследования: наличии характерных клинических и пальпаторных признаков, показателях функционального состояния щитовидной железы, результатах ультразвукового исследования (УЗИ) щитовидной железы, наличии антител к компонентам ткани щитовидной железы, данных пункционной биопсии щитовидной железы.

Следует отметить, что АИТ — это клинический диагноз, устанавливаемый на основе клинических признаков и результатов инструментального и лабораторного исследования. Ни один из методов, даже самый информативный, сам по себе не позволяет диагностировать АИТ. В целом же чем больше у пациента имеется клинических, инструментальных и лабораторных признаков заболевания, тем больше вероятность наличия АИТ.

Клиника. Наиболее типичным для АИТ является присутствие симптоматики гипотиреоза, реже — гипертиреоза. Вместе с тем эти клинические признаки очень неспецифичны, так как у значительной части пациентов с АИТ имеется эутиреоз. При гипертрофической форме АИТ может определяться (пальпаторно и/или визуально) увеличение щитовидной железы, которая имеет плотную, часто неоднородную структуру. Таким пациентам нередко ставят диагноз “узловой зоб”. При наличии достаточных оснований у пациентов с подозрением на АИТ следует провести дополнительное обследование.

Функциональное состояние щитовидной железы. В процессе морфологической эволюции аутоиммунного процесса при АИТ функция щитовидной железы претерпевает стадийные изменения с практически обязательным исходом в гипотиреоз. Гипотиреоз различной степени выраженности диагностирован у 36,5% больных с АИТ; у 40,5% больных с помощью гормональных исследований и пробы с тиролиберином отмечен субклинический гипотиреоз, у 18,9% — состояние эутиреоза и лишь у 4,1% — гиперфункция щитовидной железы (Н. А. Сакаева, 1989). Таким образом, среди пациентов с АИТ преобладают больные с субклиническими и манифестными формами гипотиреоза.

У некоторой части больных АИТ в дебюте заболевания возможно наличие гипертиреоза, который связывают с процессом деструкции ткани щитовидной железы вследствие аутоагрессии и поступлением в кровь большого количества ранее синтезированных гормонов. Другой причиной транзитор- ного гипертиреоза (называемого также хашитоксикозом) может быть наличие антител, стимулирующих продукцию тиреоидных гормонов. Однако роль этих антител не очень велика: Гистологическая классификация хронических тиреоидитов (по Mizurami и соавт., 1992) Гистологическая группа

Классификация по Woolner Хронический оксифильно-клеточный тиреоидит

Хронический смешанный тиреоидит

Диффузная клеточная инфильтрация: от умеренной до выраженной

Оксифильные изменения эпителиальных клеток: почти всегда

Фиброз: от умеренного до выраженного

Диффузная клеточная инфильтрация: умеренная

Диффузный тиреоидит, оксифильный эпителий

Диффузный тиреоидит, лимфоидный тип

Диффузный тиреоидит, приводящий к эпителиальной деструкции

Диффузный тиреоидит, различные эпителиальные изменения Хронический фокальный, легкий тиреоидит