Что собой представляет процесс агрегации тромбоцитов и как он проходит?

Агрегация тромбоцитов — что это такое,расшифровка анализа и методы исследования

Причины понижения и повышения агрегации

Повышение уровня агрегации или гиперагрегация — состояние, при котором кровь медленно течет по сосудам и быстро сворачивается. Провокаторами такого отклонения могут выступать:

  • сахарный диабет;
  • гипертоническая болезнь;
  • онкологическое поражение почек, ЖКТ или крови;
  • атеросклероз сосудов;
  • лейкоз;
  • сепсис;
  • лимфогранулематоз;
  • хирургическое иссечение селезенки;
  • менструация у женщин.

Умеренная гиперагрегация тромбоцитов при беременности — норма. Такое отклонение возникает из-за необходимости питать кровью плаценту. Своего пика значение достигает в 3 триместре гестации.

Снижение агрегации тромбоцитов происходит из-за следующих патологий:

  • тромбоцитопатия;
  • болезни кроветворной системы;
  • применение антиагрегантов;
  • почечная недостаточность;
  • нарушение функционирования щитовидной железы;
  • анемия;
  • злоупотребление спиртными напитками.

Агрегация тромбоцитов

Показания к проведению анализа

Агрегация тромбоцитов исследуется при:

  • геморрагических расстройствах (повышенная кровоточивость);
  • тромбофилии (нарушение свертываемости с повышенным риском тромбозов);
  • тяжелом атеросклерозе;
  • сахарном диабете;
  • перед проведением оперативных вмешательств;
  • при беременности;
  • при мониторинге эффективности антикоагулянтной и антиагрегантной терапии.

Также, это исследование важно в диагностике наследственных геморрагических тромбоцитопатий.

Проведение анализа и его расшифровка

Исследование агрегации тромбоцитов дает возможность обнаружить отклонение от нормы, провести диагностику патологий сердечно-сосудистой или кроветворной систем. Процедура необходима для отслеживания динамики течения некоторых заболеваний и контроля проводимого лечения.

После забора биологического материала в кровь добавляют специальные вещества — индукторы, которые схожи по строению с клетками организма, способствующими тромбообразованию.

В качестве индуктора могут выступать:

  • аденозиндифосфат или АДФ — агрегация тромбоцитов с АДФ считается наиболее распространенным методом исследования;
  • адреналин;
  • ристомицин;
  • арахидоновая кислота;
  • коллаген;
  • серотонин.

В основе методики установления агрегации — прохождение световых волн через плазму крови как до, так и после свертываемости. Учитываются такие свойства световой волны:

  • характер;
  • форма;
  • скорость.

Все это происходит в аппарате, который носит название анализатор агрегации тромбоцитов. Оборудование есть в каждой лабораторной службе Хеликс.

Расшифровка анализа проводится гематологом, а показатель зависит от вещества, которое добавили в исследуемую жидкость, и его концентрации.

Агрегация тромбоцитов с адреналином

АТ с коллагеном

АТ с ристомицином

Агрегация тромбоцитов – норма

Как уже отмечено выше, при установке степени агрегации тромбоцитов может использоваться несколько типов индукторов этого процесса. Непосредственно поэтому показатели нормы агрегации тромбоцитов могут отличаться в зависимости от характера используемого реагента. Имитация склеивания кровяных пластинок производится на стекле с добавлением индуктора. Данные вещества в норме в организме человека запускают реакции свертывания крови. Из используемых только ристомицин (ристоцеин) не имеете биологических аналогов в организме человека. Для каждого индуктора норма своя.

Агрегация тромбоцитов с АДФ

Стоит отметить, что для получения полной картины и с целью точной диагностики анализ для определения агрегации тромбоцитарной может проводиться поочередно с четырьмя индукторами. Зачастую первой осуществляется АДФ индуцированная агрегация тромбоцитов. В норме этот показатель находится в границах 30,8–77,8%. Когда агрегация тромбоцитов не вписывается в названные значения, врачи исключают наличие следующих типов заболеваний:

  • инфаркт миокарда;
  • ишемия;
  • сахарный диабет;
  • артериальная гипертензия;
  • тромбопатия наследственного генеза;
  • нарушение мозгового кровообращения;
  • тромбоцитопатия при гемобластозе.

Агрегация тромбоцитов с адреналином

Исследование агрегации тромбоцитов с использованием в качестве индуктора адреналина является информативным методом диагностики. Этот способ полностью отражает внутренний механизм активации процесса восстановления кровеносного сосуда. За норму принято значение 35,0–92,5%. Превышение показателя говорит о гиперагрегации, уменьшение – о гипоагрегации. Повышенная агрегация тромбоцитов связана с высокой концентрацией тромбоцитов в крови, патологией, стрессом, приемом ряда медикаментозных средств.

Агрегация тромбоцитов с ристомицином

При оценке того, как происходит в организме агрегация тромбоцитов, ристомицин помогает параллельно выявить и синдром Виллебранда. Это заболевание носит наследственный характер. Спонтанная агрегация тромбоцитов, сопровождающая болезнь, характеризуется появлением периодических кровотечений, которые подобны тем, что возникают при гемофилии.

Однако при этой патологии кровотечения отличаются большей продолжительностью, так как у пациента происходит нарушение сразу всех трех звеньев гемостаза. Использовать анализ с ристомицином врачи могут и при оценке эффективности проводимой терапии антиагрегантами, подборе правильной дозировки лекарства. В норме значения должны быть в промежутке 56–167%.

Агрегация тромбоцитов с коллагеном

Зачастую врачи не могут точно установить, какой из этапов свертывания крови нарушен: адгезия или агрегация тромбоцитов – тест с коллагеном помогает это определить. Если при данном типе исследования врачи фиксируют превышение установленных норм, это говорит о сбое процесса адгезии. Тромбоциты не могут нормально зафиксироваться на эндотелии поврежденных кровеносных сосудов, поэтому кровотечение долго не прекращается.

О наличии патологии судят по несоответствию значений параметра установленной норме. Для теста с коллагеном агрегация тромбоцитов должна составлять 46,5–93,2%. Превышение данных значений или снижение параметра указывает на:

  • тромбопатию;
  • гемобластоз;
  • нарушение сердечно-сосудистой системы.

Норма тромбоцитов в крови

Чтобы знать, в каком состоянии находится уровень тромбоцитов, нужно иметь представление об их норме.

ВозрастПоказатель, х 10^9/л
Новорождённый100-420
до 1 года160-320
от 1 года до 4 лет150-300
от 15 до 18 лет180-340
Мужчины после 18 лет180-400
Женщины после 18 лет150-380

Если говорить о норме агрегации, то она составляет 25-75%. В этом случае процесс склеивания тромбоцитов происходит хорошо и никакой опасности для здоровья не представляет.

Агрегация тромбоцитов

Краткое описание

Подробное описание

Наиболее распространенные способы оценки агрегации тромбоцитов заключаются в исследовании скорости и степени уменьшения оптической плотности (увеличения светопропускающей способности) тромбоцитарной плазмы при перемешивании с индукторами агрегации (при изучении спонтанной агрегации они не добавляются). Образование агрегатов тромбоцитов под действием стимуляторов может быть оценено также визуально, или с помощью микроскопа.

Качественный макроскопический метод

Принцип: Определяется визуально наличие или отсутствие агрегатов тромбоцитов в пробирке, где исследуемая тромбоцитарная плазма перемешивается со стимулятором агрегации.

Реактивы: 1. 3,8 % раствор цитрата натрия. 2. Раствор АДФ в изотоническом растворе натрия хлорида или буфере Михаэлиса рН 7,35 в концентрации 20 мкг/мл. 3. 0,85 % раствор хлорида натрия или буфер Михаэлиса, рН 7,35 (Веронал-ацетатный буфер Михаэлиса (пропись Оврена-Коллера): раствор А-диэтилбарбитуровокислый натрий — 7,35 г, ацетат натрия — 4,86 г, дистиллированная вода — 250 мл; буфер: раствор А — 250 мл, 4,25 % раствор натрия хлорида — 200 мл; 0,1 моль/л раствор НС1 — 217 мл, дистиллированная вода — 683 мл).

Оборудование: 1. Водяная баня на 37 °С. 2. Секундомер.

Материал для исследования: Тромбоцитарная плазма, лучше со стандартным содержанием тромбоцитов (250000 в 1 мкл). За 7-10 дней до обследования лекарственные препараты отменяют, так как многие из них (дипиридамол и его производные, ацетилсалициловая кислота и ее производные, индометацин, гироксихлорохин, фенилбутазон, сульфин-пиразон, низкомолекулярные декстраны, трициклические антидепрессанты и др.) угнетают агрегацию тромбоцитов.

Ход определения: Набирают в пробирку 0,2 мл плазмы и ставят ее в водяную баню при 37 °С. Через 1 мин добавляют 0,1 мл раствора АДФ и немедленно включают секундомер. Покачивая или потряхивая пробирку, отмечают время образования в смеси крупных агрегатов тромбоцитов.

Нормальные величины: 10-60 с.

Клиническое значение: При тромбастении Гланцманна агрегация тромбоцитов не наступает.

Примечание: Исследование агрегации тромбоцитов совместно с некоторыми другими методами позволяет выявить формы нарушений функций тромбоцитов (табл. 1).

Макроскопическим методом может быть исследована также агрегация под действием коллагена (в конечных концентрациях 20-50 мкг/мл), ристоцетина (ристомицина) и бычьего фибриногена (оба в конечных концентрациях 1-1,5 мг/мл). В случае нарушения реакции высвобождения тромбоцитов агрегация не развивается при перемешивании с коллагеном; для болезни Виллебранда характерен дефект ристомицин-агрегации; болезнь Бернара — Сулье распознается по отсутствию одновременно ристомицин- и фибриноген-агрегации.

Таблица 1.
Наиболее частые формы врожденных нарушений функций тромбоцитов

Болезнь (синдром)Ретенция тромбо- цитовАгрегация под действиемРетр акция сгустка
АДФ, адреналинаКолл агенаБычьего фибри-
ногена
Ристо- цетина (ристо- мицина)
Первая
волна
Вторая
волна
Тромбастения
Гланцманна
Нару- шенаНару- шенаНару- шенаНару- шенаНорм.Норм.Нару- шена
Аспирино- подобный синдромНорм. или нарушенаНорм.Норм.
Болезнь (недостаточность) пула храненияНару- шена
Болезнь (синдром) Бернара –
Сулье
Норм. или

Реактивы и оборудование: 1. растворы аггристина 12 и 15 мг/мл; 2. часовые стекла.

Материал для исследования: богатая тромбоцитами цитратная плазма

Ход определения: К 0,45 мл богатой тромбоцитами плазмы на часовом стекле добавляют 0,05 мл раствора аггристина, и, постоянно премешивая, начинают отсчет времени до появления видимых агрегатов (“симптом снежного вихря”). Для первого исследования достаточно использовать раствор аггристина концентрацией в 12 и 15 мг/мл. В сомнительных случаях целесообразно приготовить полный ряд растворов. Во всех случаях тест следует начинать с исследования контрольной плазмы, богатой тромбоцитами, которая смешана с раствором аггристина наибольшего разведения. Необходимо проводить два параллельных исследования. Для реакции достаточна комнатная температура.

Оценка результатов: У страдающих болезнью Виллебранда агрегаты не возникают или образуются значительно позже. Он меньше, чем агрегаты контрольной плазмы. При разнице в 10 сек результат исследования свидетельствует о патологических изменениях, а при разнице в 5-10 с результат сомнительный. В последнем случае очень важно провести исследование полным рядом разбавленных растворов.

Что собой представляет процесс агрегации тромбоцитов и как он проходит?

+7 (495) 225 12 61
+7 (804) 333 22 61
(бесплатно по России)
info@renam.ru

О нас Каталог Документы Поддержка Фармкомпаниям Научная инф. Контакты Типы нарушений функции тромбоцитов:

Болезнь фон Виллебранда (возможно — тромбоцитарный тип болезни фон Виллебранда)

Дефекты рецепторов TxA2

Дефект α-адренергических рецепторов

Дефицит плотных гранул

Расстройства, связанные с MYH9

До проведения специфических анализов, исследующих функциональные свойства тромбоцитов, рекомендуется выполнить следующие лабораторные тесты:

  1. Общий анализ крови с определения количества тромбоцитов и среднего объема тромбоцитов. Это имеет значение при наследственной макротромбоцитопении (синдроме Бернара-Сулье), микротромбоцитопении (синдроме Вискотта-Олдрича), при некоторых заболеваниях костного мозга.
  2. Изучение мазка крови и морфологии тромбоцитов. Необходимо для установления таких диагнозов, как псевдотромбоцитопения, синдром серых тромбоцитов. В некоторых случаях, например, при тромбоцитопении Хегглина мазок крови может показать наличие телец Деле (светло-серо-голубых овальных базофильных лейкоцитарных включений, расположенных в периферической цитоплазме нейтрофилов).

Специфические лабораторные тесты для определения функциональных свойств тромбоцитов включают в себя такие обследования как:

— скрининговые тесты, отражающие функциональную активность тромбоцитов, например, активированное время свертывания (АСТ), время кровотечения (ВК) и PFA-100,
— агрегометрия например, классическая агрегометрия по Борну,
— проточная цитометрия для количественной оценки наличия или отсутствия мембранных гликопротеинов тромбоцитов,
— специализированные исследования, применяемые в научно-исследовательских лабораториях.

Принцип метода агрегатометрии по Борну:

Метод измерения агрегации тромбоцитов турбидиметрическим методом по Born (по Борну) основан на регистрации изменений светопропускания в суспензии тромбоцитов. Эти изменения обусловлены снижением светорассеивания и увеличением светопропускания (прозрачности) суспензии в процессе образования тромбоцитарных агрегатов.

В классической агрегометрии по Борну используется плазма, богатая тромбоцитами (БТП). В агрегометре БТП перемешивается в кювете при температуре 37°С. При добавлении агониста образующиеся агрегаты тромбоцитов поглощают меньше света, что регистрируется фотоэлементом.

ОТП – обедненная тромбоцитами плазма, БТП – богатая тромбоцитами плазма.

Наглядно принципы агрегометрии по Борну можно увидеть на анимационной англоязычной презентации, любезно предоставленной авторами научного сайта http://www.platelet-research.org — http://www.platelet-research.org/3/aggregometry.htm.

Преаналитическая вариабельность

Препараты, блокирующие функции тромбоцитов, включают в себя НПВП (нестероидные противовоспалительные препараты), специфические антитромбоцитарные препараты, такие как клопидогрель, а также некоторые антибиотики, антидепрессанты, бета-блокаторы и пр. На функцию тромбоцитов могут влиять также такие продукты, как чеснок, куркума и кофеин, продукты с высоким содержанием жиров (они могут привести к появлению хиломикронов в плазме, что препятствует нормальному светопропусканию в процессе проведения тестирования агрегации тромбоцитов).
Ряд факторов может влиять на правильность результатов агрегации тромбоцитов:

— очень высокое или низкое количество тромбоцитов;

— температура — образцы крови для тестирования агрегации тромбоцитов следует хранить при комнатной температуре;

— рН — агрегацию тромбоцитов следует проводить при физиологическом значении рН;

Агонисты тромбоцитов:

Добавление агониста тромбоцитов к ОТП приводит к активации тромбоцитов, изменению их формы от дискоидной до сферической, которая связана с увеличением оптической плотности в процессе активации тромбоцитов. Единственным исключением из этого являются адреналин (эпинефрин), который не приводит к изменению формы тромбоцитов, и ристоцетин, который вызывает не агрегацию, а агглютинацию тромбоцитов.

Существуют два типа агонистов:

сильные агонисты — коллаген, тромбин, ТхА2, арахидоновая кислота — непосредственно вызывают агрегацию тромбоцитов, синтез и секрецию ТхА2 гранул тромбоцитов.

слабые агонисты — АДФ и адреналин — вызывают агрегацию тромбоцитов, не вызывая секреции.

Сильные агонисты при низких концентрациях могут действовать как слабые агонисты, но слабые агонисты, даже при высоких концентрациях, не будут действовать в качестве сильных агонистов.

С некоторыми слабыми агонистами (АДФ и адреналин) кривая агрегации тромбоцитов может иметь двухфазный вид — начальную волну агрегации (первичную волну), а затем вторичную волну агрегации, которая, как правило, необратима. При более высоких концентрациях АДФ две волны агрегации сливаются и двухфазный сигнал отсутствует.

Реакция агрегации к агонисту усиливается при высвобождении ТхА2 из фосфолипидов мембран и секреции АДФ из плотных гранул. АДФ и ТхА2 являются агонистами, которые, взаимодействуя с их специфическими рецепторами, усиливают реакцию агрегации тромбоцитов.

Рабочие концентрации используемых агонистов и механизм их действия:

АДФ связывается со своим рецептором на поверхности тромбоцитов. Первоначальное связывание приводит к высвобождению внутриклеточного кальция и изменению формы тромбоцита, ведущее к образованию первичной волны агрегации. Вторичная волна отражает высвобождение АДФ из гранул хранения тромбоцитов. Низкая доза АДФ вызывает лишь первичную агрегацию и ее эффект является обратимым.

АДФ связывается с двумя G-белками рецепторов P2Y1 и P2Y12. Связывание АДФ с рецептором P2Y1 вызывает изменение формы и инициирует агрегацию тромбоцитов (первичную волну) за счет мобилизации кальция. Рецептор P2Y12 считается основным АДФ-рецептором и ответственным за полную агрегацию тромбоцитов через ингибирование аденилциклазы.

Коллаген связывается с рецепторами GРVI и GРIa / IIa, индуцируя высвобождение содержимого гранул, пул TXA2, а затем приводит к устойчивой активации GPIIb-IIIa.Рецептор GРIa / IIa участвует в адгезии тромбоцитов. Рецептор GРVI участвует в передаче сигналов тромбоцитов и генерации TхA2.

Низкая –50 nmol/L

Используемая аббревиатура: БТП – бедная (обедненная) тромбоцитами плазма, ОТП – обогащенная тромбоцитами плазма, TхA2 — тромбоксан А2, С – концентрация, GP – гликопротеид.

Вид классической двухфазной кривой агрегации тромбоцитов:

При введении адреналина и низких доз АДФ обычно образуется двухфазная кривая агрегации, в то время как при введении других агонистов, либо при высоких концентрациях индукторов, возможно слияние первой и второй волн. При двухфазной агрегации вторая волна связана с реакцией высвобождения гранул тромбоцитов.

Параметры агрегатограммы.

Основные параметры агрегатограммы можно интерпретировать только после предварительной оценки активности тромбоцитов по типам кривых агрегатограммы (обратимая, двухфазная, необратимая и отсутствие агрегации тромбоцитов).

Основными параметрами агрегатограммы являются интенсивность первичной (Тпа), вторичной (Тва), максимальной агрегации (Тма) и дезагрегации (Тда). О динамике процесса агрегации на графике следует судить по углам наклона кривой агрегатограммы на этапе первичной агрегации (α1), вторичной агрегации (α2) и дезагрегации ). Характеристикой динамики реакции высвобождения эндогенных стимуляторов агрегации тромбоцитов является время латентного периода для коллаген-индуцированной агрегации (tлп) и время начала вторичной агрегации (tва) в норме для двухфазных кривых агрегатограммы (высоких доз АДФ и адреналина).

Для агрегации, индуцированной коллагеном важно также оценить укорочение или удлинение латентного периода (tлп) по сравнению с величиной этого показателя у здоровых людей.

Качественная оценка агрегатограммы позволяет не только диагностировать гипер- или гипореактивность тромбоцитов, но и предположить причины их возникновения. Для количественной регистрации различных типов агрегатограмм следует вычислять следующие показатели:

— при необратимой агрегации – Тма, Тпа, Тда, Tва, α1, α2, из которых самыми информативными являются Тва, α2 и Tва;

— при обратимой агрегации – Тма и Тда.

Диапазон колебаний основных показателей агрегатограммы:

Параметры агрегатограммыДиапазон измененийПараметры агрегатограммыДиапазон изменений
Тма30-50%Tва30-45 с
Тва30-40%α160-75 º
Тда60-80% (от величины Тпа)α260-75 º
Тпа10-20%β30-45 º
tлп25-30 с

Референсные значения

Агрегационная активность в норме составляет при использовании индукторов:

  • Агрегация тромбоцитов с АДФ (5,0 мкмоль/мл): 60-90%
  • Агрегация тромбоцитов с АДФ (0,5 мкмоль/мл): 1,4-4,3%
  • Агрегация тромбоцитов с адреналином: 40-70%
  • Агрегация тромбоцитов с коллагеном: 50-80%

Исследование агрегационной способности тромбоцитов

Повышение агрегации – маркер гиперагреационного синдрома и тромбофилий. Наиболее часто используются турбидиметрический метод Борна, основанный на регистрации изменений светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы и метод исследования агрегации тромбоцитов, основанный на анализе флуктуаций светопропускания, вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале.

Материал для исследования. Цитратная богатая тромбоцитами плазма

Метод исследования определяется порядком работы на том или ином типе агрегометра.

В качестве индукторов наиболее часто используют растворы АДФ, ристоцетина, коллагена, адреналина, арахидоновой кислоты. Также могут использоваться растворы тромбина, серотонина и др.

Агрегация тромбоцитов с АДФ

Воздействие малых доз АДФ (обычно 1*10 -7 моль) приводит к формированию двойной волны агрегации. Первая фаза (первичная волна) зависит от добавленного экзогенного АДФ, а вторая фаза (вторичная волна агрегации) возникает за счет реакции высвобождения собственных агонистов, содержащихся в гранулах тромбоцитов. Большие дозы АДФ (обычно 1*10 -5 моль) приводят к слиянию первой и второй волн агрегации.

При анализе агрегатограмм обращают внимание на общий характер агрегации (одноволновая, двухволновая; полная, неполная; обратимая, необратимая) и скорость агрегации. Появление двухволновой агрегации при стимуляции АДФ в концентрациях, вызывающих в норме обратимую агрегацию (обычно 1-5 мкмоль), указывает на повышение чувствительности тромбоцитов, а развитие одноволновой неполной (а часто и обратимой) агрегации при стимуляции АДФ в концентрациях 10 мкмоль и больше – на нарушение реакции высвобождения тромбоцитов.

Агрегация тромбоцитов с ристоцетином

Определение агрегации тромбоцитов с ристоцетином в плазме применяют для количественной оценки фактора Виллебранда. В основе метода лежит способность ристоцетина стимулировать in vitro взаимодействие фактора Виллебранда с тромбоцитарным гликопротеидом Ib. В большинстве случаев болезни Виллебранда отмечается нарушение ристоцетин-агрегации при нормальном ответе на воздействие АДФ, коллагена и адреналина. Нарушение ристоцетин-агрегации выявляют и при болезни Бернара-Сулье. Для дифференциации применяют тест с добавлением нормальной плазмы: при болезни Виллебранда после добавления нормальной плазмы ристоцетин-агрегация нормализуется, в то время как при синдроме Бернара-Сулье этого не происходит. Индуцированная ристоцетином агглютинация тромбоцитов снижена при большинстве случаев болезни Виллебранда, кроме типа IIВ.

Агрегация тромбоцитов с коллагеном

Агрегация тромбоцитов с коллагеном имеет достаточно выраженную латентную фазу, во время которой происходит активация фосфолипазы С. В зависимости от концентрации используемого реагента продолжительность этой фазы может составлять 5-7 минут. После завершения этого периода в тромбоцитах происходят процессы, приводящие к образованию вторичных посредников, вследствие чего развивается секреция тромбоцитарных гранул и синтез тромбоксана А2, что сопровождается резким усилением межтромбоцитарного взаимодействия.

В лабораторно-клинической практике коллаген чаще всего используют в конечной концентрации 50 мкг/мл, однако коллагены разных фирм могут обладать различной активностью, что необходимо учитывать при их применении.

Агрегация тромбоцитов с адреналином

Адреналин при контакте с тромбоцитами взаимодействует с α2-адренорецепторами, что вызывает ингибирование аденилатциклазы. Не исключено, что механизм, лежащий в основе реализации эффекта адреналина и развития первой волны агрегации, не зависит от образования тромбоксана А2, реакции высвобождения или синтеза фактора агрегации тромбоцитов, а связан со способностью адреналина прямо изменять проницаемость клеточной мембраны для ионов кальция. Вторая волна агрегация возникает как результат реакции высвобождения и продукции тромбоксана А2.

Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой

Арахидоновая кислота – природный агонист агрегации, причем ее действие опосредовано эффектами простагландинов G2 и H2, тромбоксана А2, и включает активацию как фосфолипазы C с последующим образованием вторичных посредников, мобилизацией внутриклеточного кальция и расширением процесса активации клеток, так и фосфолипазы А2, что непосредственно приводит к освобождению эндогенной арахидоновой кислоты. Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой происходит достаточно быстро, поэтому кривая, характеризующая этот процесс, чаще носит одноволновый характер.

Для индукции агрегации кровяных пластинок арахидоновую кислоту используют в концентрациях 10 -3 -10 -4 моль. При работе с арахидоновой кислотой следует учитывать, что на воздухе это вещество очень быстро окисляется.

Пробу на агрегацию с арахидоновой кислотой рекомендуют проводить в случаях использования лекарственных средств, влияющих на реакцию агрегации (например, ацетилсалициловая кислота, пенициллин, индометацин, делагил, диуретики), что нужно учитывать при оценке результатов исследований.

Индуцированная агрегация с АДФ

Тромбоциты играют значимую роль в жизни человека: они предотвращают потерю крови, соединяясь друг с другом на стенке поврежденного сосуда. Этот процесс – склеивания тромбоцитов – и называется агрегацией. Важно, чтобы данный параметр не отклонялся от значений нормы, иначе это чревато кровопотерей или образованием тромба, способного перекрыть весь диаметр сосуда и привести к отмиранию тканей.

Важно, чтобы данный параметр не отклонялся от значений нормы, иначе это чревато кровопотерей или образованием тромба, способного перекрыть весь диаметр сосуда и привести к отмиранию тканей.

Агрегация тромбоцитов: что это такое?

Процесс агрегации тромбоцитов в конгломераты состоит в следующем: при травме сосуда тромбоциты соединяются с фактором Виллебранда и коллагеном субэндотелиального слоя.

Агрегация тромбоцитов с коллагеном вызывает активацию красных клеток крови, причем они становятся источниками компонентов, стимулирующих агрегацию: тромбоксана и серотонина. Дезагрегация тромбоцитов – это обратный агрегации процесс.

Агрегация тромбоцитов – это защитная функция организма, но и она подвержена влиянию патологических реакций.

С одной стороны, агрегация тромбоцитов спасает нас от избыточной кровопотери, что актуально при хирургических операциях, обширных травмах и родах, с другой – гиперагрегация приводит к образованию тромба.

Тромбы очень опасны: их перемещения по кровеносной системе в сердце, головной мозг или легочную артерию могут привести к быстрой смерти. Исследование агрегации тромбоцитов учитывает их способность к соединению: при отклонениях выше нормы возможно появление инфаркта или инсульта, ниже нормы – кровопотеря, анемия, истощение.

Что такое агрегация тромбоцитов в крови? Чтобы определить значение агрегации тромбоцитов, надо сдать анализ крови из вены в пробирку, а в таком случае, когда нет раны, необходимо создать условия для объединения тромбоцитов в конгломерат.

Для этого в лаборатории внедряется индуцированная агрегация тромбоцитов.

Условия становятся максимально близкими к среде организма, в качестве индуктора агрегации тромбоцитов берутся вещества, идентичные по химическому составу человеческим, способные вызывать тромбообразование.

Индукторами могут быть:

  • Серотонин.
  • Коллаген.
  • Адреналин.
  • Арахидоновая кислота.
  • Аденозиндифосфат (АДФ).

Способ измерения агрегации тромбоцитов заключается в пропускании света через плазму крови.

Различие между световой плотностью плазмы до момента свертывания крови и после образования сгустка и есть агрегационная активность тромбоцитов. Дополнительно определяют скорость агрегации тромбоцитов за 1 минуту, форму и тип волн.

Спонтанная агрегация тромбоцитов рассчитывается без использования индуктора.

Степень агрегации тромбоцитов:

  • норма с АДФ – 30,7 – 77,7%
  • с коллагеном – 46,4 — 93,1%
  • с адреналином – 35 — 92,5%

Подготовка к сдаче анализа

Достоверная оценка результата может быть получена в случае соблюдения следующих условий: Не кушать за 12 часов до сдачи анализа. За день до забора крови не выполнять физические нагрузки и не испытывать эмоциональные потрясения.

За 7 дней до анализа остановить прием ряда лекарственных препаратов (если это невозможно, то сообщить об этом медсестре).

За день до анализа исключить алкоголь, курение, употребление чеснока и кофе. На сдачу крови приходить здоровым, без воспаления в организме.

Отклонение от нормы

Снижение агрегации тромбоцитов может происходить по следующим причинам:

  • Наличием тромбоцитопатии.
  • Лечением антиагрегантными средствами.

Тромбоцитопатия – заболевание, при котором нарушены функции тромбоцитов (свертываемость, тромбообразование). Проявляется болезнь наличием синяков, кровотечениями, что приводит впоследствии к малокровию.

Если агрегация тромбоцитов снижена, то назначается медикаментозное лечение, которое должен осуществлять квалифицированный специалист.

Повышенная агрегация тромбоцитов может быть при:

  • Гипертонии.
  • Атеросклерозе суставов.
  • Инсульте и инфаркте.
  • Сахарном диабете.
  • Тромбозе.

Если агрегация тромбоцитов повышена, то не обойтись без консервативной терапии с применением антиагрегантных средств. Обязательно посещать врача для сдачи анализов и получения рекомендаций по лечению.

Во время беременности возможно отклонение от нормальных значений агрегации тромбоцитов.

Пониженный уровень говорит об опасности кровотечений, повышенный — проявляется при токсикозе в результате потери жидкости организмом и чреват выкидышем.

При беременности степень агрегации тромбоцитов: норма – 30-60% для любого индуктора. Анализ на агрегацию тромбоцитов назначается в случае осложненной беременности, плохого анамнеза и перед плановым зачатием.

Агрегация тромбоцитов

Описание

Агрегация тромбоцитов — показатель нарушений в сосудисто-тромбоцитарной фазе гемостаза.

Для оценки функции тромбоцитов проводится анализ на агрегацию тромбоцитов. Исследование позволяет диагностировать и предотвратить риск развития кровоточивости, тромбофилии, оценить эффективность антиагрегантной терапии и подобрать оптимальную дозу антиагрегантов.

Когда повреждаются сосуды, тромбоциты скапливаются в месте повреждения, активируются и прилипают друг к другу, образуя тромбоцитарный тромб, происходит образование первичной гемостатической пробки, которая способствует остановке кровотечения и заживлению раны. При активации тромбоцитов возникает реакция, завершающаяся активацией фосфолипазы. В результате мембрана клетки изменяет свойства и может вступать в контакт с соседними клетками. Вследствие этого тромбоциты могут агрегировать друг с другом и образовывать тромбоцитарный тромб.

Агрегация — свойство тромбоцитов соединятся друг с другом.
Адгезия — способность тромбоцитов прилипать к поврежденной интиме сосуда.
Таким образом, адгезия и агрегация — процессы необходимые для формирования так называемой «пробки», чтобы закрыть место поражения в сосудистой стенке. Усиленная активация тромбоцитов при патологии может приводить к избыточному тромбообразованию и, наоборот, при замедлении агрегации могут возникать геморрагии (кровотечения).

Активация тромбоцитов — необходимый элемент для нормального гемостаза. В нормальных условиях циркулирующие тромбоциты не взаимодействуют с внутренней поверхностью и эндотелиальными клетками сосудов. Но при повреждении стенки сосудов в просвет сосуда выходит коллаген и тромбоциты при участии фактора Виллебранда прилипают (адгезия) к поврежденному участку сосуда.

Повышенная агрегация тромбоцитов сопровождается ишемической болезнью сердца и развитием инфаркта миокарда.

Показания:

  • для определения причин тромбозов при невынашивании беременности, при бесплодии;
  • при неудачных попытках ЭКО;
  • при сердечно-сосудистых заболеваниях — инфарктах, инсультах;
  • во время использования оральных контрацептивов;
  • во время планирования беременности и при беременности;
  • для выяснения причин повышенной кровоточивости и прогноза риска развития кровоточивости;
  • во время приема антиагрегантов;
  • для выявления чувствительности или резистентности к антиагрегантам;
  • для диагностики приобретенных и врожденных тромбоцитопатий.

Подготовка
Специальная подготовка не требуется. Взятие крови рекомендуется проводить не ранее, чем через 6–8 часов после последнего приема пищи. Накануне исследования следует исключить приём алкоголя и курение, физические и эмоциональные нагрузки.

Если пациент принимает лекарственные препараты, следует проконсультироваться с врачом по поводу целесообразности проведения исследования на фоне приёма препаратов или возможности его отмены перед исследованием, длительность отмены определяется периодом выведения препарата из крови.

Интерпретация результатов
Единицы измерения: %
В процентах норма соответствует 25–75%.

Факторы, повышающие результат:

  • гепарин;
  • гемолиз пробы крови;
  • липемия;
  • никотин.

Факторы, понижающие результат:

  • избыточное потребление чеснока (угнетает агрегацию тромбоцитов);
  • аспирин (ацетилсалициловая кислота ингибирует агрегацию тромбоцитов, блокируя синтез тромбоксана А2);
  • азлоцидин, каптоприл, карбамат, карбенциллин, хлорохин, хлорпромазин, клофибрат, ципрогептадин, декстран, дипиридамол, мочегонные, флюменавая кислота, гидроксихлорин, изосорбид динитрат, мезлоциллин, моксалактам, нифедипин, нитрофурантоин, пенициллин, фентоламин, пиперациллин, прометазин, пропранолол, простогландин Е1, пириндол, сульфинпиразон, тикарциллин, трициклические антидепрессанты;
  • тромбоцитопения.

Отклонения от нормы
Аномальная агрегация тромбоцитов сочетается со следующими состояниями:

  • нарушения тромбоцитов, вызванные дефицитом гликопротеиновых рецепторов мембраны, дефицитом мест хранения, дефицитом высвобождения АДФ;
  • недостаток белков плазмы, обеспечивающих взаимодействие тромбоцитов со стенками сосудов, в том числе фактора фон Виллебранда, фибриногена, фибронектина;
  • присутствие аномальных метаболитов и компонентов плазмы при уремии, диспротеинемии, синдроме диссеменированного внутрисосудистого свёртывания;
  • коллаген-сосудистые расстройства (синдром Марфана, osteogenesis imperfecta);
  • миелопролиферативные расстройства (эссенциальная тромбоцитемия, истинная полицитемия, хроническая миелоидная лейкемия);
  • тромбастения Glanzmann’s (Гланцманна): недостаток гликопротеина IIb/IIIa, отсутствие агрегации при действии АДФ, коллагена, адреналина, тромбина, но нормальная агрегация при действии ристомицина;
  • синдром Bernard-Soulier (Бернара-Сулье): недостаток Ib; нормальная агрегация под действием АДФ, коллагена, адреналина; недостаточная агглютинация под действием ристоцетина. В отличие от болезни фон Виллебранда агглютинация при действии ристомицина не корригируется при добавлении нормальной плазмы;
  • дефицит мест/пулов хранения (синдром Chediak- Higashi, гликогеноз типа I, синдром серых тромбоцитов, синдром Hermansky-Pudlak, синдром TAR тромбоцитопения —Trombocytopenia/pathia with Aplasia of the Radius. Этот синдром относится к группе врожденной патологии мегакариоцитарно-тромбоцитарного аппарата, сочетающийся с аномалиями костного аппарата — двустороннее отсутствие лучевой кости с укорочением предплечий, иногда с деформацией позвоночника, лопаток, дисплазией тазобедренных суставов, незаращением нёба, мышечными дефектами, косоглазием, гипоплазией легких, врожденными пороками сердца), синдром Wiskott-Aldrich: агрегация тромбоцитов может быть аномальной, часто вследствие отсутствия или снижения вторичного высвобождения АДФ;
  • дефицит циклооксигеназы: аномальная агрегация тромбоцитов в связи с неспособностью активировать путь простагландина; аспирино-подобный дефект;
  • болезнь фон Виллебранда: нормальная агрегация при действии АДФ, коллагена, адреналина; отсутствие или снижение агглютинации при действии ристоцетина (за исключением типа IIВ, где агглютинация при субнормальной концентрации ристоцетина происходит).

Снижение агрегации тромбоцитов

  • прием ацетилсалициловой кислоты, индометацина, больших доз фуросемида.

Что собой представляет процесс агрегации тромбоцитов и как он проходит?

Кровяные пластинки, безъядерные клетки крови, являются основой первичного гемостаза. Интактные тромбоциты имеют форму гладких двояковыпуклых дисков диаметром 2-5 мкм. Этосамые малые по размерам клетки крови. Плазматическая мембрана тромбоцитов, состоящая из полярных фосфолипидов и белков, имеет толщину 7-8 нм. Углеводородные остатки гликопротеидов и гликолипидов плазматической мембраны образуют внешнюю оболочку клеток, называемую гликокаликсом [3].

К специфическим органеллам тромбоцитов относятся три типа гранул: α-гранулы, плотные гранулы и лизосомы, а также митохондрии, вакуоли, пероксисомы, аппарат Гольджи. Каждая из этих органелл имеет собственную мембрану, а митохондрии – двойную мембрану. Плотные гранулы содержат АДФ, АТФ, серотонин, пирофосфат, ионы Са 2+ ; α-гранулы – фактор роста, ß-тромбоглобулин, фактор VIII, антиген фактора Виллебранда, фактор V, фибриноген, тромбоспондин, фибронектин, лизосомальные гранулы – фосфатазы, арилсульфатазы, кислые гидролазы [3].

У кровяных пластинок большинства видов биологических объектов имеются две дискретные системы мембран: систему открытых каналов и плотную тубулярную систему. Последняя представлена узкими трубочками диаметром около 50 нм, которые на поперечном сечении тромбоцитов могут выглядеть как пу зырьки. Часть канальцев расположена по экватору тромбоцита, другие можно обнаружить среди органелл. Они не контактируют с плазматической мембраной тромбоцитов, органеллами и системой открытых каналов. Плотная тубулярная система тромбоцитов подобна эндоплазматическому ретикулуму скелетной мышцы [3, 6].

Тромбоциты человека имеют системы открытых каналов и секретируют через них содержимое своих гранул. В цитозоле тромбоцитов расположены структуры, не имеющие мембран – микротрубочки, микрофиламенты и гранулы гликогена. Микротрубочки и микрофиламенты являются основными компонентами цитоскелета. Цитоскелет определяет форму и объем клеток, а также их способность прикрепляться к различным поверхностям, перемещать органеллы из одной части клетки в другую и образовывать многочисленные псевдоподии. Тромбоцитарные микротрубочки имеют вид цилиндрических образований диаметром 25-30 нм. Главным структурным компонентом микротрубочек является тубулин. В дисковидном тромбоците периферический пучок микротрубочек образует концентрическую систему из 5-30 микротрубочек, расположенную под плазматической мембраной тромбоцитов вдоль экватора тромбоцита [7].

В цитозоле кровяных пластинок расположено большое количество микрофиламентов. При осьмиевой и глутаральдегидной фиксации в тромбоцитах выявляются микрофила менты диаметром 3-10 нм. Предполагается, что тромбоцитарные микрофиламенты диаметром 3-5 нм имеют актиновую природу, а филаменты диаметром 6-10 нм – миозиновую. Микрофиламенты контактируют друг с другом, плазматической мембраной и мембранами гранул [3].

При воздействии агрегантов на тромбоциты они изменяют форму от дисковидной до сферической, образуют псевдоподии и принимают неправильную форму. Организованное концентрическое кольцо микротрубочек распадается. Изменяется распределение микрофиламентов и микротрубочек, имеет место образование клубков из микротрубочек. Физические изменения структуры цитоскелета ассоциированы с выбросом химических веществ из цитоплазмы тромбоцитов во внеклеточную среду [7].

Кровяным пластинкам принадлежит ведущая роль в первичной остановке кровотечений из микрососудов. In vivo тромбоциты циркулируют в кровотоке, практически не взаимодействуя друг с другом, другими клетками крови и эндотелием сосудов. В случае повреждения кровеносного сосуда тромбоциты подвергаются действию различных веществ, инициирующих процессы агрегации (склеивание тромбоцитов друг с другом) и адгезии (прилипание клеток к поврежденной поверхности), в результате которых образуется тромбоцитарная пробка. Наибольший интерес с точки зрения тромбоцитарного гемостаза представляет механизм агрегации тромбоцитов [5].

В случае взаимодействия индуктора с рецептором на поверхности тромбоцитов развивается агрегация тромбоцитов. Процессу агрегации тромбоцитов с образованием агрегатов, предшествует стадия их активации- изменение формы от дисковидной до сферической и образование псевдоподий. Именно в таких преобразованных формах тромбоциты взаимодействуют друг с другом, формируют агрегаты и выбрасывают содержимое гранул [2].

Активацию и последующую агрегацию тромбоцитов вызывают различные по своей химической природе вещества: тромбин, коллаген, АДФ, адреналин, серотонин, ионофор А23187, простагландины G2 и Н2, арахидоновая кислота, тромбоксан А2, фактор активации тромбоцитов, а также вещества, отсутствующие в организме, – форболовые эфиры, латекс, лектины. Такие вещества, как АДФ, серотонин, адреналин, вазопрессин, являются слабыми агрегирующими агентами: тромбин, коллаген, ионофор А23187 – сильными индукторами агрегации [1]. Степень агрегации тромбоцитов и реакции высвобож дения (выброса содержимого гранул в окружающую среду) зависит от природы агрегирующего агента и его дозы.

При воздействии на тромбоциты сильных индукторов (например, тромбина) агрегация клеток происходит с большой скоростью и носит, как правило, необратимый характер [4].

В случае действия высоких концентраций слабых агонистов и низких концентраций сильных агентов из тромбоцитов высвобождаются вещества, содержащиеся в плотных гранулах – АДФ,серотонин, адреналин, ионы Са 2+ (реакция высвобождения I). Высокие концентрации коллагена и тромбина инициируют освобождение веществ из α-гранул и лизосом (реакция высвобождения II)[6]. Реакция высвобождения необходима для формирования тромбоцитарной пробки, спазма сосудов и ускорения процесса свертывания крови [6].

Очевидно, имеет место несколько путей активации тромбоцитов веществами, вызывающими агрегацию клеток и реакцию высвобождения. Первый путь включает метаболизм арахидоновой кислоты и образование тромбоксана А2, который является ионофором кальция. Второй путь связан с метаболизмом фосфатидилинозитолов и образованием фосфатидной кислоты, также являющейся ионофором кальция. Третий путь, возможно, обусловлен высвобождением лизолецитинового компонента фосфолипидов плазматической мембраны тромбоцитов, назы ваемого фактором активации тромбоцитов. Предполагают, что ФАТ может активировать тромбоциты независимо от высвобождения Са 2+ [3]. Существенная роль отводится также механизмам активации цАМФ, контролирующего уровень ионов Са 2+ в цитоплазме [6].

Изменение формы тромбоцитов, образование псевдоподий, взаимодействие их друг с другом и реакция высвобождения происходят с участием гликопротеидов и сократительных белков тромбоцитов, активность которых регулируется ионами Са 2+ [5].

Активации тромбоцитов под действием индукторов агрегации может быть разделена на три этапа. Первый этап включает взаимодействие агреганта с рецепторами плазматической мембраны и передачу сигнала внутрь клетки, второй – преобразование сигнала с участием вторичных мессенджеров, в результате которого происходит выход ионов Са 2+ в цитоплазму. Третий этап, который является внешним проявлением ответа клетки, включает агрегацию и реакцию высвобождения химических веществ из клетки. Важная роль в восприятии внешнего сигнала, его трансляции и ответе принадлежит компонентам плазматической мембраны тромбоцитов.

Несмотря на то, что молодой возраст является периодом оптимального функционирования всех систем организма, он не свободен от возможности возникновения патологии гемостаза [2, 4, 5]. Возникающие в молодом возрасте отклонения гомеостаза способны нарушать тромбоцитарные функции [1]. К числу таких состояний относится избыточная масса тела и повышение артериального давления, однако, несмотря на накопленную информацию о тромбоцитах, их функциональное состояние у молодых людей с данными отклонениями изучено недостаточно. Не определена степень активности функций тромбоцитов у молодых людей, ведущих малоподвижный образ жизни и регулярно тренирующихся физически, не найдены основные механизмы, обеспечивающие формирование тромбоцитопатии при избыточной массе тела и тенденции к повышению артериального давления.

1. Баркаган Л.З. Рациональная диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза у детей // Педиатрия.- 1983.-№3.-С.64-66.

2. Баркаган Л.З. Нарушение гемостаза у детей. – М.: Медицина, 1993. – 176 с.

3. Вашкинель, В.К. Ультраструктура и функция тромбоцитов человека / В.К. Вашкинель, М.Н. Петров. – Л.: Наука. Ленингр. Отделение, 1982.-88с.

4. Левицкая С.В., Баркаган Л.З., Чупрова А.В., Серебряный В.Л. Тромбофилии у детей. М., 1989.

5. Руководство по гематологии / Под ред. А.И. Воробьева (издание третье). – М.: Ньюдиамед, 2005. – Т.3. – 416 с.

6. Шитикова А.С. Тромбоцитарный гемостаз. – СПб.: Изд-во СПбГМУ, 2000. – 227 с.

7. Шиффман Ф.Дж. Патофизиология крови. Пер. с англ.-М.-СПб.: «Издательство БИНОМ»- «Невский диалект», 2000.-448с., ил.

Ссылка на основную публикацию